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生物化学

薄层层析

2025-04-28 生物化学 加入收藏
и3MaÑJIOB 和IIIpaÑбep 在1938 年叙述了植物 萃取 物在氧化铝薄层上 的分离,但是直到1956 年以后薄层层析才逐渐引起各方面的注意和重视

и3MaÑJIOB 和IIIpaÑбep 在1938 年叙述了植物 萃取 物在氧化铝薄层上 的分离,但是直到1956 年以后薄层层析才逐渐引起各方面的注意和重视。 薄层层析法是将支持物在玻璃板上均匀地铺成薄层,把待分析的混合物 加到薄层上,然后选择合适的溶剂进行展开,而达到分离鉴定的目的。

薄层 层析兼有柱层析和纸层析的优点。它操作方便,设备简单,展开时间短,一 般只需几分钟到几十分钟。它灵敏度高,适用于微量样品的分析(小到 0.01mg),但是加大薄层的厚度则又能分离较多(大到500mg)的样品。

薄 层层析还有一个优点是除了可用一般显色剂外,对某些薄层材料还可用腐蚀 性显色剂,另外,还可以在支持物中加 荧光染料 以有助于点的鉴别。

薄层层析法分离物质的原理依所用不同支持物的性质而不同,可以是吸 附层析、离子交换层析、分配层析或是凝胶过滤。

1、薄层的制作在玻璃板上涂铺一层薄层,最简单的方法是在一根玻 棒的两端绕几圈胶布,用玻棒压在玻板上,把支持物向一个方向推动,即成薄层。

有时用上述方法制得薄层不太均匀,可能用有机玻璃自制一个涂铺器即 能取得满意的结果。

薄层厚度小于200um 时将影响Rf 值,一般情况下厚度为250um 比较合 适。

可做薄层材料的物质很多,如硅胶、氧化铝、纤维素粉、DEAE 纤维素、 葡聚糖等,具体选择哪一种依所研究的问题而定。硅胶对大多数的物质分离 都是适宜的。

有时在硅胶中加入煅石膏作为粘合剂,这时一旦与水调合就需快速操作。

2、展开薄层层析的加样与纸层析基本相同。薄层的展开需在密闭的 器皿中进行,溶剂必须达到饱和,可以在器皿内部贴上浸湿了溶剂的 滤纸 条。薄层层析的展开方式与纸层析一样,可以是上行、下行、单向或双向。

3、定位和纸层析一样,可用适当的显色剂喷雾或根据组分的紫外线 吸收或荧光来定位。在有放射性物质时用扫描来定位。


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