噬菌体肽库到构建方法

噬菌体肽库到构建方法     利用噬菌体展示技术建立随机肽库的方法是：通过化学合成的方法，随机合成特定长度肽的寡核苷酸片段，然后通过基因工程重组技术插入至噬菌体载体的外壳蛋白编码基因中并转化大肠杆菌，增殖和产生的噬菌体其表面携带有外源多肽，每个噬菌体表面表达一种外源肽，所有这些噬菌体构成随机肽库。利用目标分子从整个噬菌体随机肽库中经筛选一扩增一筛选等步骤，最后获得能与靶分子高亲和力结合的噬菌体克隆。通过测定该噬菌体的DNA序列后，就可知道噬菌体所携带的多肽氨基酸序列。     噬菌体肽库技术由两大核心内容组成：①利用丝状噬菌体或噬菌粒作为表达载体，通过基因工程重组技术将外源随机合成的DNA片段插入噬菌体外壳蛋白编码基因中，并在噬菌体表面展示该外源DNA所编码的多肽；②利用目标靶分子如抗体、受体蛋白等，在噬菌体随机肽库中与展示在噬菌体表面的多肽发生特异性结合，再通过有效的亲和淘选方法，筛选出高亲和力结合多肽的表达噬菌体。     噬菌体肽库的构建方法很多，要考虑的因素也很多，除了上面已经讨论的噬菌体衣壳蛋白的选择、随机多肽的展示方式以及展示系统的选择外，还要考虑构建肽库时选择所用的密码子和随机肽序列旁侧残基，以及肽库中多肽的长度和多样性问题。