过夜菌液(overnight suspension culture)之培养

仪器用具：

酒精灯

接种环

药品试剂：

E. coli 菌株 （JM109）

LB 培养液：

1% （w/v） Bacto tryptone, 0.5% Bacto yeast extract, 1% NaCl,以5 N NaOH 调至pH 7.0 后，以湿热法灭菌。

LB agar plates: LB 培养液中添加1.5% （w/v） Bacto agar.

方法步骤：

1） 每组应有一支15 mL 试管，装有2 mL LB 培养液，请写上JM109,并标明组别及日期。

2） 将接种环在酒精灯火焰上烧红，环上方部份亦以火焰烧过。使接种环冷却并刮下菌落，将培养皿盖子置回。

3） 打开试管盖 （一手握住试管，并以拿着接种环那只手的小指旋开盖子），将管口在酒精灯上过火。将沾有菌落的接种环伸入培养液中并轻敲管壁使菌落脱离。将管口再次在酒精灯上过火后，将盖子置回。

4） 将接种环在火焰上烧红灭菌后置回实验桌上。

5） 将试管的盖子稍微旋开，并以胶带固定管盖，以免震荡培养时盖子松动掉落。

6） 将试管置于37℃培养箱或水浴中震荡培养过夜。

7） 将长有JM109 之培养皿交回给助教。

与细菌接触过的任何容器或培养基，使用后须经过灭菌才可丢弃。 实验中若不小心被菌液溅到，马上用大量清水冲洗，并以70%酒精消毒。桌面或地面有菌液翻覆时，须以10%漂白水擦拭清理。