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siRNA表达载体的构建成功要点
对每个基因设计并检测两到四个siRNA序列为了找到潜在靶位点,扫描靶基因中的AA序列。记录每个AA 3’端19个核苷酸作为潜在siRNA靶位点。潜在靶位点需通过
2025-01-06 7 -
真空浓缩仪的使用方法
如果在乙醇沉淀后,核酸中还残留乙醇,就很难用水或缓冲液溶解沉淀。如果你急用或者需要去除大体积的挥发性液体,可以使用真空浓缩设备。真空浓缩设备由离心机、真空泵、加
2025-01-06 10 -
siRNA是从牵牛花过表达发现的吗
siRNA(small interfering RNA, 小干扰RNA)并不是从牵牛花的过表达现象中发现的,而是从研究植物基因沉默和RNA干扰现象中逐步发展起来
2025-01-06 8 -
离心机的种类
有很多关于离心机类型的描述性术语,但那些不是严格的定义。在实验室中,离心机通常以制造者的名字相称。高速与超速离心机都带有冷冻装置,之所以需要冷冻是因为高速离心会
2025-01-06 6 -
利用有机溶剂分离纯化高分子质量DNA
分子克隆最基础的操作可能就是核酸纯化了。去除蛋白质的关键步骤经常是简单地利用酚:氯仿和氯仿把DNA 从水相中萃取出来。这种萃取可在进行一步法克隆操作前有效灭活和
2025-01-06 11 -
DNA 样品的酚抽提
酚抽提通常用来对DNA 或RNA 样品进行蛋白质的去除。酚与水不互溶,当它们混合时会形成两相,水相和酚相。当含有DNA 的水溶液与酚混合时,蛋白质会进入酚相,再
2025-01-06 10 -
亲和层析纯化抗体,如何减少洗脱后中和沉淀的出现?
随着亲和层析技术的发展,蛋白纯化技术相对简单,蛋白纯化技术的应用也越来越普遍,一步亲和层析即可达到90%以上的纯度。然而,蛋白纯化的过程中各个环节不容忽视。样品
2025-01-06 15 -
封闭问题可大可小,千万不能掉以轻心
Western Blot是检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化的首选方法,也是实验室常见的实验方法。完整的Western实验过程比较长,
2025-01-06 9 -
常用电泳缓冲液的配制方法
缓冲液使用液浓贮存液(每升)Tris-乙酸(TAE)1:0.04mol/L Tris-乙酸50:242g Tris 碱0.001mol/L EDTA57.1ml
2025-01-06 13 -
western-blot实验注意事项
• 滤纸、胶、膜之间的大小,一般是滤纸>=膜>=胶。• 滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡,气泡会造成短路。• 因为DEPF膜的疏水性,膜必须首先在甲醇
2025-01-06 7 -
PCR (多聚酶链式反应)
PCR 是1985 年由Kary Mulis 在Cetus 公司发明的,是一种体外复制和扩增DNA的方法。DNA模板首先在高温下变性,当温度降低时,DNA 两侧
2025-01-06 5 -
用测序酶进行标记/终止测序反应常见问题
问题可能的原因解决办法四条泳道同一个位置都有条带,特别是靠近引物的地方DNA 模板不纯观察对照DNA 是否存在同样问题,如果不存在,重新制备模板DNA试剂不纯或
2025-01-06 4 -
早期游泳对Shank3基因敲除的自闭症大鼠模型的行为和纹状体转录组的影响
自闭症谱系障碍(ASD)是一种发育障碍,其特点是在儿童期有社会行为缺陷和刻板行为,至今仍缺乏令人满意的医疗干预。早期游泳干预是一种非侵入性的方法,结合了丰富的环
2025-01-06 8 -
DNA 的 PCR 扩增
一、 PCR反应体系的组成1.PCR扩增缓冲液:50mM KCl10mM Tris HCl( pH8.0)1.5mM MgCl22.寡核苷酸引
2025-01-06 11 -
细胞转染siRNA后,目标基因的表达反而升高的原因是什么?
siRNA转染后目标基因不降反升的现象可能由多种原因引起,常见的因素包括:siRNA设计不合理:siRNA的靶点选择不佳,未能有效靶向目标基因的mRNA,导致抑
2025-01-06 76