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用引物延伸法进行 RNA 的分析
原理引物延伸法主要用于 mRNA5' 末端作图。poly (A) + RNA 先与过量 5' 末端标记的且与靶 RNA 互补的单链寡核苷酸引物杂
2024-06-01 30 -
聚合酶链式反应
原理材料与仪器热稳定 DNA 聚合酶 旁观者 DNA 正向引物 反向引物 模板 DNA扩增缓冲液 氯仿 dNTP 贮存液聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶 屏蔽型枪头
2024-06-01 18 -
通过PCR扩增在扩增DNA产物末端引入限制性核酸内切酶酶切位点
原理材料与仪器噬菌体 T4 DNA 连接酶 限制性内切核酸酶 靶 DNA氯仿 EDTA 乙醇 酚 氯仿 乙酸钠 TE琼脂糖凝胶 水浴箱步骤一、材料1. 缓冲液与
2024-06-01 24 -
应用 PCR 的遗传工程
原理本方案（由德克萨斯大学西南医学中心的 Andereson 提供）叙述在克隆化的哺乳动物 cDNA 的 5‘ 与 3‘ 端同时导入限制性内切核
2024-06-01 24 -
应用mRNA反转录扩增cDNA（RT-PCR）
原理酶促催化使RNA反 转 录 为cDNA第一链。 一 条寡聚脱氧核苷酸引物先 与 mRNA杂交，然 后 由RNA依赖的DNA聚合酶催化合成相应互补的cDNA拷
2024-06-01 25 -
cDNA 5’末端的快速扩增（5’-RACE）
原理在分子克隆中没有比分离缺乏相应的 mRNA 5‘ 末端的序列特征结构的 cDNA 克隆更易失败的了。通常存在于 cDNA 基因文库中的部分克隆，由于
2024-06-01 21 -
cDNA 3'末端的快速扩增（3’-RACE)
原理在用 oligo (dT) 引物构建的 cDNA 文库中，偶而发生部分 cDNA 克隆缺失了与靶 mRNA 3‘ 末端互补的序列。这部分序列到底是在
2024-05-30 42 -
应用混合寡核苷酸引物引导的cDNA扩增（MOPAC）
原理对于仅仅知道某种蛋白质的部分序列，而要克隆其基因的最佳方法是，利用已知氨基酸序列设计相应的寡核苷酸，用此寡核苷酸作为探针去筛选基因文库钓取全长基因或者用寡核
2024-05-30 25 -
随机引物法(利用寡核苷酸延伸法标记DNA放射性)
原理利用寡核苷酸作引物，DNA 聚合酶可沿单链模板起始 DNA 的合成（Gotilian 1969)。如果寡核苷酸的序列不均一，它们就可在模板的多位点上与模板杂
2024-05-30 43 -
随机引物法（在融化琼脂糖存在下利用随机寡核苷酸延伸进行DNA的放射标记）
原理此法系可用于从低熔点琼脂糖凝胶中回收 DNA 的放射性标记 ( Feinberg 和 Vogelstein 1983，1984)。材料与仪器大肠杆菌 DNA
2024-05-30 37 -
利用聚合酶链反应制备放射性标记的DNA探针
材料与仪器耐热的 DNA 聚合酶 模板 DNA乙酸铵 扩增缓冲液 氯仿 乙醇 TE dCTP dNTP 溶液屏障吸头 微量离心管 正向置换进样器 Sephade
2024-05-30 29 -
用大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段标记双链DNA的3’端
材料与仪器限制性内切核酸酶 大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段 模板 DNA乙酸铵 乙醇 dNTP 溶液Sephadex G-50 离心柱 水浴步
2024-05-30 39 -
用[α-32P] 3'脱氧腺苷5'-三磷酸或[α-32P]双脱氧ATP末端标记双链DNA的3'突出端
材料与仪器限制性内切核酸酶 小牛胸腺末端转移酶 模板 DNA乙酸铵 乙醇 酚 氯仿 末端转移酶缓冲液Sephadex G-50 离心柱步骤一、材料1. 缓冲液和
2024-05-30 31 -
差异显示实验
材料与仪器无菌玻璃器皿 无菌 Eppendorf试 管 Eppendorf枪头 无菌 falcon离心管4 mol L 异硫氧酸胍RNA提取试剂盒 Eppend
2024-05-30 29 -
基因表达的系列分析实验
材料与仪器玻璃及塑料器皿溶液与缓冲液 引物试剂盒 MPC-E PCR仪 Gene PulserII 型系统步骤一、一般原则若用于 SAGE 的 RNA 有足够的
2024-05-30 20
