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四环素控制系统诱导基因表达实验(pTet-tTAK 稳定转染(第二轮))
原理tTA 是一种融合蛋白,它是由来自于大肠杆菌的四环素抑制蛋白和疱疹病毒的 VP16 蛋白的转录激活区域组成的。在缺乏四环素时,tTA 就结合到并激活位于基因
2024-05-30 26 -
四环素控制系统诱导基因表达实验(pTet-tTAK 稳定转染(第一轮))
原理tTA 是一种融合蛋白,它是由来自于大肠杆菌的四环素抑制蛋白和疱疹病毒的 VP16 蛋白的转录激活区域组成的。在缺乏四环素时,tTA 就结合到并激活位于基因
2024-05-30 24 -
两种重组痘苗病毒共感染细胞
原理含有 pT7 控制的外源基因(本实验「重组痘苗病毒(VTF7-3)感染后的脂质体转染」)的重组质粒,通过同源重组可整合到痘苗病毒中,并制备重组病毒储液。将此
2024-05-30 35 -
重组痘苗病毒(VTF7-3)感染后的脂质体转染
原理本方案从构建外源基因位于 PT7 和 T7 终止子之间的质粒载体开始,然后用重组质粒通过脂质体介导转染已经被vTF7-3(可以持续表达T7 RNA聚合酶的痘
2024-05-30 53 -
组织切片染色方法大全
1油红O染色(Oil Red O Stain)油红O染色可用于脂肪细胞和中性脂肪的组织学染色。主要试剂丙二醇、油红O溶液、苏木精溶液染色特点脂肪细胞:红色中性脂
2024-05-27 826 -
PCR 产物电泳银染实验(聚丙烯酰胺凝胶法)
原理聚丙烯酰胺凝胶(PAG)是由丙烯酰胺单体和交联剂亚甲基双丙烯酰胺,在引发剂过硫酸胺(AP)提供自由基和催化剂四甲基乙二胺(TEMED)的作用下聚合而成。丙烯
2024-05-25 26 -
用于 PCR 的模板 DNA 制备实验(胸腹水或尿液)
材料与仪器步骤1. 标本 10 ml 以上,2000 r/min 离心 10 分钟,倒去上清液。用指弹匀沉淀物,加入适量组织裂解液,37℃ 下放置半小时以上。2
2024-05-25 31 -
用于 PCR 的模板 DNA 制备实验(含血标本)
材料与仪器步骤1. 3 ml 外周血或 1 ml 骨髓液放入含 50 μl 0.5mol/L EDTA 的无菌离心管(15 ml 管)中。2. 2000 r/m
2024-05-25 32 -
用于 PCR 的模板 DNA 制备实验(冰冻片)
材料与仪器步骤1. 将 10 μl 冰冻切片直接放入含组织裂解液的离心管中。2. 无菌尖头刀片刮下,放入 300~900 μl 组织裂解液中,并加入 20 mg
2024-05-25 28 -
直接法(DNA 免提法)
材料与仪器步骤1. 标本太少时,可将一张石蜡切片经脱蜡,水化,蒸馏水清洗,无菌蒸馏水浸泡,取出晾至半干。2. 加入 20~80 μl 直接裂解液中,加 20 m
2024-05-25 29 -
改进的石蜡切片 DNA 提取方法
材料与仪器步骤1. 5 μm 厚的石蜡切片 5 至 10 张贴在干净的载玻片上,常规烘片,脱蜡,水化,蒸馏水清洗,无菌蒸馏水浸泡,取出晾至半干。2. 无菌尖头刀
2024-05-25 38 -
酚-氯仿法提取石蜡组织中 DNA
材料与仪器步骤1. 10 mm 厚石蜡切片 10~15 张,置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。2. 脱蜡 二甲苯 1200 μl,9000
2024-05-25 40 -
缺口平移实验基本方案
原理缺口平移是一种将标记核苷酸掺入到DNA中的方法,这些DNA可以是孤立的DNA片段或是一个完整克隆。该方法利用两种酶的联合作用:DNA酶I在DNA链上打开缺口
2024-05-25 34 -
FISH 技术基本实验基本方案
材料与仪器70%乙醇 SSC 磷酸盐缓冲溶液(PBS) Hemo-De清理试剂 蛋白酶溶液水浴锅 增湿器 玻片步骤一、制备培养的中期细胞标本1.在一个独立小室里
2024-05-25 32 -
质粒构建技术(双酶切实验)
简介在探索基因功能的实验中,我们需要过表达目的基因以判断其发挥的功能,因此我们需要将目的基因构建到表达载体上,再将载体通过侵染或瞬时表达的方式转入植物。双酶切实
2024-05-25 37