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DNA片段连接
原理核酸片段可以通过连接酶的作用连接起来而获得重组分子。材料与仪器λDNA EcoT14I：由11条DNA片段组成T4 DNA连接酶及其配套的10连接缓冲液 0
2024-05-22 61 -
质粒DNA酶切
原理限制性内切酶能够特异性地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异性位点上，并切割双链DNA。材料与仪器标准pUC19（2686bp）E
2024-05-22 66 -
牙签法小量制备质粒DNA实验
原理用牙签从琼脂培养基上挑取的菌落可直接用于制备质粒 DNA。所得的闭合环状 DNA 往往杂质太多，不能作为大多数限制酶的底物。材料与仪器抗生素 溴酚蓝溶液 E
2024-05-22 65 -
聚乙二醇沉淀法纯化质粒DNA实验
原理这种方法最早由 Richaed Treisman ( 英国，伦敦，ICRF) 参照 Lis 的工作而设计。Lis 是最早用聚乙二醇（PEG ) 分离不同大小
2024-05-22 72 -
不连续梯度法（氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心法纯化闭环 DNA 实验）
原理通过不连续或预先形成的氯化铯（CsCl）梯度离心，可在离心管中获得含有不同浓度 CsCl 的溶液分层，样品位于中层（三级梯度法）或底层（两级梯度法）。材料与
2024-05-22 91 -
连续梯度法（氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心法纯化闭环 DNA 实验）
原理用含氯化铯和溴化乙锭的悬浮密度梯度离心法分离质粒和染色体 DNA 的方法，取决于与线状 DNA 和闭环 DNA 结合的溴化乙锭的量的差异。材料与仪器粗制质粒
2024-05-22 138 -
用有机溶剂抽提法从DNA中除去溴化乙锭实验
原理欲从经 CsCl 梯度纯化的 DNA 中去除溴化乙锭，常用有机溶剂反复抽提的方法。随后可用透析或沉淀的方法去除 CsCl。材料与仪器DNA 样品乙醇 水饱和
2024-05-22 73 -
用离子交换层析法从DNA中去除溴化乙锭实验
原理经过氯化铯梯度离心所纯化的 DNA 中的溴化乙锭可以通过离子交换层析法去除，随后则用乙醇沉淀去除氯化铯。材料与仪器DNA 样品乙醇 HCl NaCl 酚 氯
2024-05-22 77 -
NaCl离心法去除质粒DNA制备物中的小片段核酸
原理常规的质粒 DNA 制备物中都会不同程度地污染有来自宿主菌基因组或质粒断裂碎片的小分子 DNA 或 RNA。尽管它们的分子质量不大，但数量多，会对制备物中
2024-05-22 62 -
DNA的提取实验
原理酚为有效的蛋白质变性剂，并且饱和的酚与水相有效的分开．因此，在含核酸的样品加入酚，可将样品中的蛋白质变性后形成沉淀层，位于水相与有机相的界画，从而达到纯化核
2024-05-22 63 -
氯化锂沉淀法去除质粒DNA制备物中的小片段核酸
原理氯化锂沉淀法去除质粒制备物中小片段核酸（包括 DNA 和 RNA ) 的原理是基于两种核酸在氯化锂溶液中的溶解度有所不同。氯化锂是强脱水剂，可降低 RNA
2024-05-22 70 -
质粒DNA的去磷酸化实验
原理去除 5‘ 端的磷酸基可防止质粒 DNA 的自身连接和环化。在体外连接反应中，DNA 连接酶可在邻近的两个分子间形成磷酸二酯键。但只有当一个分子的
2024-05-22 89 -
建立随机重叠 DNA 插入文库实验
材料与仪器乙酸铵 ATP 乙醇 甘油 蒸馏水 IPTG MgCl2 NaCl 酚 聚乙二醇 TE TM 缓冲液 Tris-HCl TTE 缓冲液 X-gal T
2024-05-22 73 -
向平末端DNA连接合成接头实验
原理接头是指合成的能够自身互补的 DNA 片段，一般长 8~16 个核苷酸，互补的片段复性后可形成平末端的含有一个酶切位点的双链分子。材料与仪器T4 噬菌体连接
2024-05-22 99 -
在低熔点琼脂糖中连接质粒和目的DNA实验
原理质粒克隆操作最费时间的步骤是用电泳的方法对预期大小的外源 DNA 片段和质粒 DNA 片段进行纯化，在以下的方案中（取自Struhl 1985)，质粒和外源
2024-05-22 85
