-
菌落的裂解和DNA与滤膜的结合实验
原理本方案介绍如何从携带重组质粒的克隆中释放出 DNA 并将其固定于硝酸纤维滤膜或尼龙膜的方法，这一方法最初由 Grunstein 和 Hogness 使用。材
2024-05-21 132 -
通过凝胶电泳测定λ噬菌体原种和裂解物中DNA的含量实验
原理本方案阐述了一种快速估计 λ 噬菌体原种中 DNA 含量的方法。该方法首先可用于发现原种和裂解物中的噬菌体颗粒的得率是否能满足大量纯化的需要，其次可用于检测
2024-05-21 109 -
通过CsCl 等密度梯度离心纯化λ噬菌体颗粒实验
原理CsCl 等密度梯度离心用于制备最高纯度的感染性 λ 噬菌体颗粒，它没有任何细菌核酸的污染。从这种噬菌体颗粒中提取的 DNA 可用作 DNA 测序的模板、亚
2024-05-21 131 -
λ噬菌体载体DNA的碱性磷酸酶处理实验
原理λ 噬菌体两臂内部末端 5'-磷酸基团的去除，能有效防止自连和减少非重组噬菌体的背景。当使用含单一克隆位点的插入型载体（如 λgt10、λgt11
2024-05-21 99 -
经双限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体DNA的制备实验
原理置换型载体（如 λ2001、λDASH、EMBL 系列、Charon 34、Charon 35 和 Charon 40 ) 含有一系列的限制位点，它们在中央
2024-05-21 114 -
可被单一限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体DNA的制备实验
原理在某些情况下，制备好的 λ 噬菌体 DNA 经限制酶的简单消化即可用于克隆。但只有当所用载体能用遗传学方法筛选含有外源 DNA 序列的重组噬菌体时（如 EM
2024-05-21 116 -
用甲酰胺从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA实验
原理可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效，但在某种意义上它比以前的操作方法更快。材料与仪器限制性内切核酸酶 λ
2024-05-21 98 -
利用λ噬菌体文库筛选 DNA 结合蛋白实验
材料与仪器ATP 结合缓冲液 变性溶液 二硫苏糖醇 EDTA 乙醇激酶 连接酶缓冲液 酚 氯 仿筛选缓冲液 SDS 醋酸钠 TE T4 噬菌体 DNA 连接酶
2024-05-21 106 -
用于基因组文库中的真核DNA的部分酶切（预反应）实验
原理不管高分子质量 DNA 的碱基组成与序列如何，通过水压机械剪切（hydrodynamic shearing) 均可将其以半随机形式片段化。但是，用这种方法制
2024-05-21 115 -
λ噬菌体臂的纯化（通过蔗糖密度梯度离心）实验
原理与插入型载体不同，置换型载体的基因组含有中部的填充片段，为了容纳外源 DNA 片段，填充片段必须被去除。该过程一般被称为“λ 臂的制备”，包括用限制酶消化
2024-05-21 106 -
用噬菌粒载体制备单链DNA
原理噬菌粒巧妙地组合了质粒和丝状噬菌体的特征。除了基本特征外，这些质粒通常是高拷贝数的，并带有一个修饰后的丝状噬菌体的主要基因间区。这个区域 ( 野生型为 50
2024-05-21 131 -
应用黏粒载体构建基因组DNA文库
原理在 λ 噬菌体中构建基因组 DNA 文库的步骤与在黏粒载体中的步骤基本一致。在这两种系统中，真核 DNA 在体外与载体 DNA 连接，形成能包装到 λ 噬菌
2024-05-21 148 -
重组M13噬菌体克隆分析
原理在本方案中，当外源 DNA 大于 200~300 个核苷酸时，用重组 M13 噬菌体克隆感染细菌后释放至周围培养基中的单链 DNA 进行凝胶电泳分析即可鉴定
2024-05-21 101 -
M13噬菌体载体的克隆
原理虽然理论上 M13 重组噬菌体所能携带的外源 DNA 片段没有限制，但实际上是有限的：长片段的外源 DNA 比短片段的更易发生缺失和重排。因此如果可能，最好
2024-05-21 150 -
细胞提取物中β-半乳糖苷酶的测定实验
材料与仪器转染了感兴趣 DNA 的哺乳动物培养细胞大肠杆菌β-半乳糖苷酶 Tris-Cl 磷酸钠 ONPG Na2CO3 β-巯基乙醇 MgCl2步骤材料缓冲液
2024-05-21 110
