常用酶的配制之蛋白水解酶类的配制
蛋白水解酶类的配置 贮存液贮存温度反应浓度反应缓冲液温度预处理0.01mol/L Tris(pH7.8)链霉蛋白酶a20mg/ml-20℃（溶于水）1mg/m
蛋白水解酶类的配置
| 贮存液 | 贮存温度 | 反应浓度 | 反应缓冲液 | 温度 | 预处理 | |
| 0.01mol/L Tris(pH7.8) | ||||||
| 链霉蛋白酶a | 20mg/ml | -20℃（溶于水） | 1mg/ml | 0.01mol/L EDTA | 37℃ | 自消化b |
| 0.5% SDS | ||||||
| 0.01mol/L Tris(pH7.8) | ||||||
| 蛋白酶Kc | 20mg/ml | -20℃（溶于水） | 50μg/ml | 0.005mol/L EDTA | 37～56℃ | 无须预处理 |
| 0.5% SDS |
a：链霉蛋白酶是从链球菌（Streptomyces griseus）中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。
b：自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染，经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下：把该酶的粉末溶解于10mmol./l Tris?HCl(pH7.5)、10mmol/l NaCl中，配成20mg/ml浓度，于37℃温育1h。经消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密封试管中，保存-20℃。
c：蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）中纯化得到。该酶有两个Ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去Ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶K消化过程中通常加入EDTA（以抑制依赖于Mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化对蛋白酶K具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/l Ca2+而不含EDTA的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGT（pH8.0）至终浓度为2mmol/L,以鳌合Ca2+。
(责任编辑：大汉昆仑王)
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