免疫血清的制备及免疫球蛋白的提取

免疫血清的制备及免疫球蛋白的提取   实验题目 ：免疫血清的制备及免疫球蛋白的提取 教   师：XXX 实验类型： 基础 学　　时 ：12(参考) 内　　容 ： 一、实验目的 ： 1.理解免疫血清的来源及主要成份。 2.掌握制备抗特定抗原的动物抗血清的方法。 3.掌握免疫球蛋白的提取过程。 二、实验原理 ： 免疫血清的制备是利用动物，有目的地生产某种抗体，通过这种方法得到的抗体是多克隆抗体，可用于体外的抗原抗体反应。 通过对正常健康兔子免疫注射通过免疫佐剂处理的外源抗原，多次免疫后使兔子产生针对此抗原的特异性抗体，通过离心得到的血清就是抗特定抗原的动物抗血清。 硫酸氨分级沉淀后使用阴离子交换柱纯化出来免疫球蛋白。 三、试剂与器材 ： 1.实验动物：兔子 2.抗原：（小牛血清） 3.佐剂：福氏完全佐剂 4.乳化搅拌器 5.注射器及针头 6.手术器械：剪刀，手术刀，线，血管钳，塑料导管 7.离心机及离心管 8.三角瓶 9.酒精棉球 10. Na2 N3 四、操作方法： 1.免疫血清制备： 选择动物→免疫原→免疫途径、剂量和次数→应用佐剂→免疫血清效价测定→采血→分离血清→保存免疫血清 2.IgG的提取： 制备的免疫血清→饱和硫酸铵沉淀→离心→冷盐水溶解→透析→脱盐→DEAE纤维素层析→样品收集→IgG鉴定 五、关键步骤与注意事项： 1.对实验动物进行免疫时，抗原量不要一次加的过多，要少量多次注射。 2.向制备的免疫血清中加入饱和硫酸铵时要缓慢逐滴加入。 3.DEAE纤维素层析柱平衡至少要24小时以上。 六、思考题： 1.免疫佐剂处理外源抗原对实验动物免疫时需要注意哪些方面才能保证最终获得的抗血清的活性最高？2.免疫血清要是需要长时间保存需要注意哪些问题？