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生物化学

高质量的内切酶 vs.普通内切酶

2025-05-08 生物化学 加入收藏
不好的内切酶常常被各种 蛋白酶 、非特异外切酶和核酸外切酶污染。使用被外切酶污染的内切酶切割DNA,则会在切割底物的同时破坏产物的末端(外切酶偷偷切掉1、2个b

不好的内切酶常常被各种 蛋白酶 、非特异外切酶和核酸外切酶污染。

使用被外切酶污染的内切酶切割DNA,则会在切割底物的同时破坏产物的末端(外切酶偷偷切掉1、2个bp,琼脂糖电泳却看不出来),让后续的连接、克隆和表达出现问题! 而NEB提供的内切酶大部分都经过重组改造,在最大程度上避免了外切酶污染的问题,让你的基因安全可靠!

好的内切酶不好的内切酶
· 活性高 · 品质稳定,保存期长 · 无其它 核酸酶 污染(包括外切酶污染)·活性不高 ·保存一段时间后活性迅速下降 ·有其它 核酸酶 的污染(包括外切酶污染)


质粒DNA

 酶切反应 

好的内切酶切割

   不好的内切酶切割  
完整的DNA片段        连接   完整的DNA片段



           少量的外切酶损坏DNA末端               不完整的DNA片段+1、2个dNTP
      
连接

成功连接,克隆并表达连接失败,克隆不成功,无法表达或产物不正确


NEB EcoRV: Survival rate=49/50Company T EcoRV: Survival rate=3/50
看看,不同质量的内切酶,实验结果大不相同!


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