酶的性质实验—激动剂和抑制剂对酶活力的影响
【实验原理】
许多物质能影响酶的催化活性，能加速酶的催化作用的物质称为激动剂，能抑制酶的催化作用的物质称为抑制剂。本实验分别考察MnCl 2 和HgCl 2 对碱性蛋白酶的激动和抑制作用。
【实验材料】
1. 实验器材
试管及试管架；漏斗及滤纸；恒温水浴锅；温度计；移液管；721分光光度计
2. 实验 试剂
⑴ 1% 酪蛋白溶液：同酶特异性实验
⑵ 1/2000碱性蛋白酶溶液：同酶特异性实验
⑶ pH10 硼砂氢氧化钠缓冲液: 同酶特异性实验
⑷ 8×10 -3 M MnCl 2 溶液
⑸8×10 -3 M HgCl 2 溶液
(6) 0.4 mol/L碳酸钠溶液
⑺ 0.4 mol/L三氯醋酸溶液
⑻ 福林 试剂 : 同酶的特异性实验
【实验操作】
取三支 试管 , 按下表加入试剂：
试剂 | 试管 编号 | ||
1 | 2 | 3 | |
1% 酪蛋白溶液(ml) | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
pH10 缓冲液(ml) | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
8×10 -3 M MnCl 2 溶液(ml) | 1.0 | ― | ― |
8×10 -3 M HgCl 2 溶液(ml) | ― | 1.0 | ― |
蒸馏水(ml) | ― | ― | 1.0 |
1/2000碱性蛋白酶溶液(ml) | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
实验结果 |
混合均匀后，于40℃ 水浴 中保温15分钟. 然后每管各加入0.4M 三氯醋酸溶液3.0ml，分别过滤，各吸取滤液1.0ml，加0.4M碳酸钠溶液5.0ml，福林试剂1.0ml，摇匀，于40℃ 水浴 保温15分钟。显色后用721型分光光度计，在波长680nm处测定光密度（比色时，以 蒸馏 水作空白）并记录。
【注意事项】
1．每个人的唾液淀粉酶活性并不相同，有时差别很大，因此稀释倍数可因个人情况而定。
2．少量的激动激或抑制剂就能影响酶的活性。但激动剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激动剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。对一种酶是激动剂，对另一种酶是抑制剂。
3．反应时间要准确，做酶学实验所用的器皿必需洁净、干燥，定量准确。
【思考题】
1．什么是酶的最适温度、最适pH值？有何实际意义？
2．影响酶的催化活性的因素有哪些？简要说明作用原理。
3．酶学实验必须注意控制哪些条件？为什么？
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