酶促生物素标记cRNA探针的应用

酶促生物素标记cRNA探针基本方法和放射性标记cRNA探针同，所不同的是探针浓度为2.5μg/μl。显示探针反应步骤如下。 　　（1）用PBS冲洗粘附有切片的载片2×3min。根据情况也可用漂洗法。 　　（2）将载片浸入0.3%H2O2在PBS或甲醇内30min以封闭内源性过氧化物酶。 　　（3）PBS冲洗2×3min，用吸水纸拭干切片周围的水份，加入小鼠抗生物素血清1：100和PBS含正常羊血清（1：30），室温1h，或4℃过夜。 　　（4）PBS彻底冲洗。 　　（5）载片加生物素化抗小鼠IgG（1：100）30min室温。 　　（6）PBS彻底冲洗。 　　（7）应用ABC复合物与等量的1%牛血清白蛋白-PBS液混合孵育1h，室温。 　　（8）PBS彻底冲洗。 　　（9）将切片覆以新鲜配制的0.025贐溶液，0.02%H2O2,孵育3～15min。 　　（10）水洗，复染，脱水，透明和以甘油/PBS或DPX封固。如需要可用银染，多层ABC或PAP法加强染色效果。