酶标记

问：我想知道，用什么方法进行酶标记可以非常有效呐？过碘酸钠标记怎么样？

答：第一节 间接法测抗体

基本原理

将特异性抗原包被在固相载体上，形成固相抗原，加入待检标本（含相应抗体），其中抗体与固相抗原形成抗原-抗体复合物，再加入酶标记的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体，亦称二抗），与上述抗原-抗体复合物结合。此时加入底物，复合物上的酶则催化底物而显色。

试剂与设备

纯化抗原。

酶标抗体（辣根过氧化物酶标记抗人免疫球蛋白）

底物 (邻苯二胺OPD或四甲联苯胺TM

底物缓冲液（Na2HPO4　0.184g +构椽酸0.047g + H2O10ml + H2O2 5ul）

PBS（见附录）

pH9.6碳酸盐缓冲液CBS（见附录）

洗液（PBS +0.05%体积的Tween20）

稀释液（100ml PBS + 1g牛血清血蛋白）

终止液（２mol/L　H2SO4）

酶标板（聚苯乙烯板）

微量加样器

吸水纸

封口胶带

酶标仪

洗板机等。

实验步骤

一　予试验

（一）抗原包被的酶标板的制备

１. 以碳酸盐缓冲液将抗原稀释成适当浓度（参考：5ug/ml），加入酶标板（50ul/孔），以胶带封口，于4℃过夜。

２. 弃抗原液，以双蒸水冲洗3次，自然干燥后以胶带封口。此为已知抗原包被的酶标板，备用。

（二）底物浓度的摸索

在底物缓冲液中加入不同量的底物（参考：5mg/10ml），加入酶标板中（50ul/孔），以胶带封口，37℃避光保存2h，在没有明显变色的条件下选择尽可能大的底物浓度。

（三）酶标抗体浓度的摸索

用稀释液稀释酶标抗体至适当倍数（参考：40~4000倍），加入已包被抗原的酶标板中（50ul/ 孔），封口后于37℃作用30min。以洗液连续冲洗5次，然后于吸水纸上拍干，加入已摸索好的底物封口后于37℃作用2h，在没有变色的条件下选择尽可能大的酶标抗体浓度。