地高辛配基随机标记DNA探针

1．标记DNA探针 每次标准的反应可标记10ng至3线性的DNA，也可标记更大量的DNA，但所有的成分和体积要相应增加。

（1）DNA探针热变性，煮沸10min，迅速冷却于冰/乙醇中5min以上，待用。

（2）取Eppendorf管（1.5ml）置于冰上，加下列及试剂：

新鲜变性的DNA 1-3

六聚核苷酸混合物 2（管5）

dNTP标记用混合底物 2（管6）

加无菌重蒸水至 19

DNA聚合酶Ⅰ大片段（Klenow） 1（管7）

（3）在37℃保温至少60min，可到20h。

（4）煮沸5min，终止反应。

（5）15000rpm离心30s，置于冰上待用。

2．预杂交 按100cm2膜用20～40ml预杂交溶液，预杂交时使溶液处于流动状态。

预杂交液组成：5㗓SC

0.5%（W/V）封阻试剂（管11）

0.1%（W/V）N-十二烷酰肌氨酸钠

0.02%（W/V）SDS

膜放入塑料袋，灌入预杂交液，排除气体后密封，在65℃预杂交过夜。