荧光抗体法诊断猪瘟

（一）材料与 试剂 1．猪瘟荧光抗体 由指定单位购买，按说明书稀释使用。 2．0.01Mol/L pH7.2PBS液 3．缓冲甘油 优级纯甘油9份和碳酸盐缓冲液1份混合而成。 4．碳酸盐缓冲液： 0.5Mol/L 碳酸钠 1份 0.5Mol/L 碳酸氢钠 3份 混合即可。 5． 荧光显微镜 6．冰冻切片机 （二）操作方法 1．组织切片制作 取新鲜的扁桃体与肾组织块，用冰冻切片机制成5μm~7μm原冰冻组织切片，粘于清洁的载玻片上（0.8 mm ~1.0mm），空气中自然干燥后，立刻在室温下放入纯丙酮固定15min，取出后PBS液轻轻漂洗数次，自然干燥后染色。如不能及时染色，可用塑料纸包好，放入低温冰箱中保存。 2．荧光抗体染色 滴加猪瘟荧光抗体（工作浓度）2~3滴，以覆盖为度，放入湿盒中，37℃感作30min（切忌染色液干涸）。以PBS液3×3min冲洗。 3．染色片半干时，滴加缓冲甘油封片，置 荧光显微镜 下观察。 4．对照的设置 将组织切片固定后，滴加猪瘟高免 血清 ，37℃感作30min，冲洗后，以猪瘟荧光 抗体 染色。 （三）结果判定 将染色好的组织片置激发光为蓝紫光或紫外光的荧光显微镜下观察。 阳性结果：扁桃体隐窝上皮细胞或肾曲小管上皮细胞的胞浆内呈明亮的翠绿色荧光，细胞形态清晰。 阴性结果：无荧光或荧光微弱，细胞形态不清晰。