白细胞介素2(IL-2)的生物学活性测定

　IL-2主要由活化T细胞产生，又为T细胞增殖所必需，故称T细胞生长因子（ T Cell Growth factor, TCGF ）。IL-2产生的水平反映T细胞的功能，牪;仅是免疫调节重要的研究对象，而且与临床多种疾病密切相关，CTLL是C57BL／6来源的。犘!鼠杀伤性T淋巴细胞细胞系，由Gills 1977年建立，只有在IL-2存在的培养基中才能生长。因此可作为指示细胞来测定待检样品中IL-2的水平。除CTLL外，丝裂原活化的T淋巴母细胞亦可作为检测IL-2活性的指示细胞。 　　(二)　方法 　　可根据实验室条件，选用３H-TdR掺入法和MTT法 　　1.　３H-TdR掺入法 　　　　　　　　IL-2依赖的CTLL用10％FCS　RPMI1640洗涤 　　　　　　　　2次，每次1000rpm, 5min, 除去原培养液中的IL-2 　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓ 　　　　　　　　　　　　　调整活细胞数1×10５／ml 　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓ 　　　　　　　　　　　96孔平底培养板中每孔加100μl 　　　　　　　　　　　CTLL悬液(1×10４／孔) 　　　　　　　　　　　　　　　　↓ 　　　　　　　　　　加入不同稀释度标准IL-2和待测样品 　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓ 　　　　　　　　　37℃CO孵箱，培养18～24h 　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓ 　　　　　　　　　每孔加３H-TdR 0.5μci／50μl 　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓ 4-6h 　　　　　　　　　用细胞收集仪收获于玻璃纤维纸上 　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓ 　　　　　　　　　干燥后，移入液闪瓶中，加入1ml闪烁液， 　　　　　　　　　于液闪仪中测β射线的cpm值 　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓ 　　计算(举例) 　　将标准IL-2不同浓度和待测样品不同稀释度时所获得的cpm值作图，犠]轴采用概率座标(probit)，横座标为Log2稀释倍数。从50％的最高cpm值画一横线，犛k标准和待检斜线的交点，即可计算出待检样品IL-2的活性单位。 　　如标准品50％最大cpm值时为1u／ml，则待测标本1∶4时为1u／ml,原液则为4μ/ml