经典补体结合反应（以马鼻疽补反为例）
一、预备试验1、绵羊红细胞悬浮液的制备 通常用公绵羊红细胞，将绵羊血液采集于带有玻璃珠的无菌容器中，充分振摇，使脱去纤维，此时血液失去凝固性，称脱纤血。亦可用阿
一、预备试验
1、绵羊红细胞悬浮液的制备 通常用公绵羊红细胞，将绵羊血液采集于带有玻璃珠的无菌容器中，充分振摇，使脱去纤维，此时血液失去凝固性，称脱纤血。亦可用阿氏液保存血液，阿氏液配方如下：
| 葡萄糖 | 24.60g |
| 氯化钠 | 5.04g |
| 柠檬酸钠（含2个分子结晶水） | 9.60g |
| 蒸馏水 | 1200ml |
溶液配好后，高压（10磅）灭菌10min，也可通过蔡氏滤器灭菌。溶液盛于瓶内，将绵羊血直接采入瓶内，血量应大致与阿氏液量相等。摇匀，置冰箱中保存，可保存3周左右。
用时将血液移入离心管内，加3～5倍量生理盐水，离心沉淀洗涤三次，每次2000r／min，离心10min，然后去掉上清液，血球泥用生理盐水配成2.50％液应用。
2、溶血素效价测定 溶血素是用绵羊红细胞，经多次免疫家兔，抽取家兔血清，加入甘油而成。在冰箱中可保存二年以上。每隔两、三个月测定效价一次。溶血素可从生物制品厂购买。
溶血素效价测定的方法：先将溶血素稀释成100倍，即0.20ml的溶血素（溶血素实量含0.10ml）加入9.80ml生理盐水混合即可。然后按表1配成稀释液：
表1 溶血素稀释表
| 稀释倍数 | 1000 | 1200 | 1500 | 1800 | 2000 | 2500 | 3000 | 3500 | 4000 |
| 1：100溶血素 | 0.10 | 0.10 | 0.10 | 0.10 | 0.10 | 0.10 | 0.10 | 0.10 | 0.10 |
| 生理盐水 | 0.90 | 1.10 | 1.40 | 1.70 | 1.90 | 2.40 | 2.90 | 3.40 | 3.90 |
| 全量 | 1.00 | 1.20 | 1.50 | 1.80 | 2.00 | 2.50 | 3.00 | 3.50 | 4.00 |
另取小反应管一列，按次序从每一稀释液取0.50ml分别加入各管中，添加时应由稀释度大的稀释液加起，这样可不必更换吸管。然后再加入生理盐水1.00ml，1︰20补体和2.50％红细胞悬液各0.50ml。在37℃水浴槽中放20min后判定结果。详细造作程序见表2。
表2 溶血素效价测定示例
| 稀释倍数 | 1000 | 1200 | 1500 | 1800 | 2000 | 2500 | 3000 | 3500 | 4000 | 溶血素对照 | 补体对照 | 血球对照 |
| 溶血素 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | —— | —— |
| 生理盐水 | 1.00 | 1.00 | 1.00 | 1.00 | 1.00 | 1.00 | 1.00 | 1.00 | 1.00 | 1.50 | 1.50 | 2.00 |
| 1：20补体 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | —— | 0.50 | —— |
| 2.50%红细胞 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 |
| 37℃水浴20min | ||||||||||||
| 结果 |
试验中发生全部溶血的溶血素最大稀释倍数（即1︰2000），微溶血素的效价，亦称一个溶血单位。做正式试验时，溶血素按二个单位稀释使用。在本例中，其使用浓度应为1:1000。
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