石蜡切片制备及H-E染色最全的实验步骤

一、准备工作 （一）洗涤实验所需器皿：（玻璃器皿的清洗） 1、  用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷 2、  将器皿在自来水下冲洗干净 3、  将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干 注：一般情况下，经以上步骤后，用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用，如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时，再经自来水彻底冲洗，再用蒸馏水过洗1~3次 烘干备用。 （二）配制： 硫酸洗液的配制 清洁液（洗液）的配制：      成分          强酸液   次强酸液   弱酸液     浓硫酸（ml）    1000       200       100    重铬酸钾（mg）    63       120       100     蒸馏水 （ml）    200       200      1000     重铬酸钾     1200g 蒸馏水      2000ml 将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中，边倒边用木棒轻轻搅拌 （三）载玻片与盖玻片的处理 1.        将所需载玻片与盖玻片清洗后，放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时 2.        流水冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍 3.        95%~100%酒精浸泡24小时，用绸布擦干备用 注：在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时，要一片片地投入，使其不致重叠。 二、常用液体的配制 （一）缓冲溶液： 1．磷酸盐缓冲液 A液：0.1mol/L磷酸二氢钠 B液：0.1mol/L磷酸氢二钠 A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（3：7≈PH7.0） 2．枸椽酸缓冲溶液 A液：0.1mol/L枸椽酸 B液：0.1mol/L枸椽酸钠 A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（6.2：42.8≈PH6.2） （二）固定剂： 1．甲醛：10%甲醛 福尔马林    100ml 蒸馏水      900ml 注：实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。 2．10％中性福尔马林钙固定液 甲醛液    10ml 蒸馏水    90ml 加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。 3．4%多聚甲醛： 8%多聚甲醛 多聚甲醛   8g 蒸馏水    100ml 加温至60℃左右，不时搅拌，成为乳白色溶液。滴加1N NaOH，并不停搅动至液体清明。 1N NaOH lN等于1L溶液中某种物质1mol除以该物质的氢当量价所得数值的量 氧化钠(NaOH )；分子量＝40．005，当量价＝1 1N Na0H的配制方法为：m＝40．005／1＝40．005g。取40．005gNaOH溶解于1L蒸馏水中 4%多聚甲醛 8%多聚甲醛         50ml 0.1M磷酸盐缓冲液   50ml PH7.2 先取50 ml 8%多聚甲醛，用0.1M磷酸二氢钠和0.1M磷酸氢二钠将PH值调至7.2 4．Bouin液： 苦味酸饱和水溶液       75ml 36％~40％福尔马林液    25ml 冰醋酸                 5m1