EAC玫瑰花环试验
原理
B淋巴细胞表面具有补体C 3 受体，红细胞可与相应的抗体（溶血素）结合形成抗原抗体复合物（EA），以红细胞作为指示细胞，通过补体传统途径活化补体，而产生活化的C 3 ，然后与活化的C 3 结合形成花环，以供计数B淋巴细胞。
材料与 试剂
1．鸡红细胞悬液的制备 由于绵羊红细胞易与T淋巴细胞形成E—玫瑰花环，易造成混淆，所以一般在检测B淋巴细胞时，采用鸡红细胞。从鸡翼下静脉采血，用肝素抗凝，以Hank’s洗涤2次备用。
2．抗鸡红细胞抗体的制备 选 2kg ～ 3kg 的健康家兔，以Hank’s液洗过的压积红细胞进行免疫，每日背部皮下注射1次，共注5次，注射量为0.5 ml、1.0 ml、1.5 ml、2.0 ml、2.5ml。第六次改用静脉注射50％压积红细胞悬液1ml，一日一次，连注3天。末次注射后7天试血，测定红细胞的凝集效价，以出现“ ”的最高抗血清稀释度判定为血凝效价。效价达1：2 000以上者为合格。应用时采用凝集价的1／2（亚凝集价）作为抗血清的稀释度（即1：4 000）。
溶血素的效价测定
试验组 | 对照组 | |||||||
管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
溶血素稀释倍数 | 10 | 10 2 | 10 3 | 2×10 3 | 3×10 3 | 4×10 3 | 5×10 3 | |
1 ％红细胞量（ml） | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | |
溶血素量（ml） | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
0.9％盐水（ml） | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
混匀， 37℃ 感作1h | ||||||||
结果判定 | - | - | - | - |
3．补体 当日采集豚鼠混合血清，用Hank’s液稀释成1︰100，置 4℃ 保存备用。
4．无Ca 2 、Mg 2 pH7.2的Hank’s液
5．姬姆萨染液
6．1％戊二醛溶液
操作方法
1．分离淋巴细胞，制成约2.5×10 6 个／ml悬液。
2．EAC悬液的制备 取4％鸡红细胞2ml于 试管 中，加入1︰4 000的鸡溶血素2ml，混匀，置 37℃ 水浴 15min，取出后离心，用Hank’s液洗涤2次，再用Hank’s液恢复至4％红细胞2ml，加入等量的1︰100稀释补体，混匀，再放置 37℃ 水浴 15min取出，用Hank’s液洗涤2次，配成4％EAC细胞悬液。
3．取淋巴细胞悬液0.2ml，加入4％EAC细胞悬液0.2ml，混匀，室温或 20℃ 作用30min。1 000r/min离心5min，吸弃过多的上清液，放入 4℃ 2h～4h。
4．取出后，将沉淀轻轻摇起，加1％戊二醛0.1ml，混匀后置 4
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