可溶性抗原的制备（菌脂多糖的制备实例）

脂多糖是革兰氏阴性细菌细胞壁的组成成分，所以抗脂多糖抗体的制备可用革兰氏阴性细菌菌体抗原来制备。 （一）热酚提取法 原理是将细菌悬液加于热酸——水混合液中，冷却，离心混合液可分为水溶液层，内含水溶性脂多糖及核酸等及酸层、内含蛋白质。近年来发现在酸层中也含糖类。经离心后沉淀含细胞残体。 1 ． 细菌浓悬液用盐水经2500r/min，20min离心洗涤一次。 2 ． 将沉淀的菌混匀于蒸馏水中，放66℃水浴，然后滴加等量的90%热酚溶液（预热至66℃），边加边摇，而后在66℃水浴中搅拌25min。 3 ． 在水浴中冷却，于4℃冰箱过夜。 4 ． 以2000r/min离心15min。 5 ． 将上层水溶液吸到另一 试管 中。 6 ． 剩下的酚层及残渣组分可再加上述同量水在热 水浴 中搅拌30min，冷却，离心，取上层水溶液。将两次提的水溶液混合，置透析袋中于生理盐水中透析2天，其间换几次盐水，以除去酚。 7 ． 透析后的水溶液层经浓缩（如用聚乙二醇在透析袋外层涂抹以除去水分）。即成粗制脂多糖，于冰箱内保存备用。 （二）超声波处理法 1 ． 获得的菌液经2500r/min，20min离心洗涤1-2次，将沉淀配成2倍于湿菌浓度的浓菌液。 2 ． 用超声波发生器中频（约相当于12000cps）处理20min。 3 ． 处理液经3000r/min，离心30min，吸取上清液即为脂多糖抗原。置4℃冰箱保存备用。 （三）煮沸法 将培养后得到的浓菌液沸 水浴 煮沸2h。置冰箱静置两星期以上（使菌体残渣自由下沉）。3000r/min离心30min，取上清夜即为粗脂多糖抗原，置冰箱中保存备用。