中性粒细胞碱性磷酸酶活性组织化学检查法

１　试剂 　　ａ．固定液：加甲醛１０ｍｌ于无水甲醇９０ｍｌ中。 　　ｂ．缓冲底质液（须临用时配制）：由１０％巴比妥钠３０ｍｌ、３．２％β－甘油磷酸钠３０ｍｌ、Ｍ／１０硫酸镁３０ｍｌ、２％硝酸钙４５ｍｌ及蒸馏水１６５ｍｌ配成。 　　ｃ．清洗液：在蒸馏水中加几滴２％硝酸钙液。 　　ｄ．２％硝酸钴。 　　ｅ．稀硫化铵液：硫化铵１ｍｌ加水至８０ｍｌ。 　　ｆ．２％碱性藏红水溶液。 ２　方法 　　ａ．指端取血推片，不宜太薄。 　　ｂ．迅速将血片置固定液中固定３０秒，然后用清洗液洗数秒钟。 　　ｃ．将已固定的血片放于缓冲底质液内，在３７℃水浴中保温２小时，然后用清洗液洗数秒钟。 　　ｄ．将上述血片依次放入２％硝酸钴液中５分钟，用清洗液洗净，然后移于稀硫化铵液中１分钟，用清洗液洗净，最后用２％碱性藏红水溶液染色１６秒，用水洗净，待干，用显微镜油镜观察结果。 ３　计算方法 　　共计数１００个中性粒细胞，视其细胞内碱性磷酸酶活力强弱，按Ｋａｐｌｏｗ法五级记分表示。将每级阳性细胞百分比乘以各该级的分数所得分数之和，即为碱性磷酸酶的积分。分级的标准如下： 　　ａ．中性粒细胞胞浆无异常着色或颗粒，为０分。 　　ｂ．胞浆内呈弥散的浅棕色，或少许细微颗粒，为１分。 　　ｃ．胞浆内有棕色散在颗粒，为２分。 　　ｄ．胞浆内有分布不均匀的棕黑色颗粒，为３分。 　　ｅ．胞浆内充满了均匀一致的棕黑色颗粒，或块状沉淀，为４分。