AO染色法（丫啶橙染色法）检测细胞凋亡

AO 染色法（丫啶橙染色法）检测细胞凋亡

【材料与试剂】

pH4.8～6.0 Tritionx-100的PBS缓冲液，

AO染料：将AO染料溶于含1%TritionX-100的PBS中，终浓度为6μg/ml，含Rnase100μg/ml，避光保存。

荧光显微镜

【操作方法】

制备活细胞悬液106 /ml；

取95μl细胞悬液，加5μl的AO染液混合、避光作用10min；

加入5ml PBS，1500r/min离心5min，弃上清，重复洗涤2次；

重悬细胞，吸一滴滴于玻片上并用盖玻片封片；

【结果判断】

在荧光显微镜下，选用515nm激发光镜检：AO染色细胞DNA呈黄色或黄绿色。当细胞凋亡时，染色呈致密浓染的黄绿色荧光或见黄绿色碎片。

【附注】PI染色法和AO染色法也可运用于石蜡切片、冰冻切片及细胞涂片的染色，方法如下：

常规石蜡切片经脱蜡、水化后（按石蜡切片HE染色的脱蜡方法），用PBS洗5min。

或冰冻切片经冷丙酮固定15min后，吹干，PBS洗5min。

或细胞学涂片用4％多聚甲醛固定30min后，PBS洗5min。

将玻片浸入盛有PI或AO染液的染色缸，室温下避光染色，作用30min。

PBS洗涤后，用盖玻片封片；

在荧光显微镜下，选用大于536nm或515nm的激发光观察结果：

PI染色将凋亡细胞胞核染色呈红色荧光。

AO染色将凋亡细胞胞核染色呈致密浓染的黄绿色荧光或见黄绿色碎