MTT法检测单核-巨噬细胞胞毒作用

MTT 法检测单核-巨噬细胞胞毒作用       单核-巨噬细胞在机体免疫反应中起着重要的作用，因此，检测单核-巨噬细胞功能对于了解机体的免疫功能状态具有重要意义。下面介绍几种常用的单核-巨噬细胞功能的检测方法。   【试剂及材料】 （1）         LPS （2）         靶细胞（L929，K562或LL937） （3）         MTT（5mg/ml）   【操作方法】 （1）         取手术切除的脾脏，分离单个核细胞，采用粘附法获得脾Mφ或采用Percoll离心沉淀法分离外周血Mφ，调整细胞浓度至5×105 /ml； （2）         将脾或外周血Mφ加入96孔板，每孔0.2ml，分别加LPS （终浓度为10μg/ml）置37℃，5％CO2 培养箱中培养48h； （3）         加入靶细胞（效靶比为10：1）作用48h； （4）         于终止培养前，每孔加入MTT 10μl，混匀后再培养4～6h； （5）         吸弃上清液，每孔加入溶剂（DMSO）100μl，稍振荡待甲肷产物充分溶解；在酶标仪上，测定OD560nm ；   【结果分析】     细胞毒性百分率按下列公式计算:  

       ODE+T=效应细胞孔OD值+靶细胞孔OD值      ODE=相应浓度单独效应细胞的OD值      ODT=相应浓度单独靶细胞的OD值