红细胞C3b受体花环及免疫复合物花环试验

红细胞C3b受体花环及免疫复合物花环试验       近年来的研究表明红细胞也是一类免疫细胞。红细胞免疫功能主要是藉助其膜表面分子（如CR1、CR3、CD58、CD59、DAF、SOD酶等）的免疫粘附作用，在体内起清除垃圾的"清道夫"作用。                【基本原理 】      红细胞膜上C3b受体可与补体致敏的酵母菌粘附形成花环（RBC-C3bR花结）；红细胞膜上粘附的IC中C3b分子可与未致敏的酵母菌粘附形成花环（RBC-IC花环）。   【试剂及材料】  （1）         待测红细胞悬液：将肝素抗凝的指血或静脉血用生理盐水洗涤离心3次，2000r/min离心3～5min，计数后配成1.25×107 /ml 红细胞悬液备用； （2）         补体致敏的酵母菌试剂:将酵母菌用生理盐水洗涤3次后，配成1％悬液，置水浴内煮沸20min，充分混匀。用二层定性滤纸（或16层纱布）过滤，除去小凝块，在低倍镜下呈单个酵母菌细胞分散状态。加等量小白鼠血清，混匀后置37℃水浴致敏15min。用生理盐水洗涤一次，2500r/min离心10min。去尽上清，用生理盐水重混悬。计数后配成1×108 /ml补体（C3）致敏的酵母菌悬液。 （3）         瑞氏法染液   【操作方法】 （1）         取两支小试管，每管加待测红细胞悬液100ｕl，第一管再加补体致敏酵母菌悬液100ｕl，第二管加未致敏的酵母菌悬液100ｕl，摇匀放37℃水浴30min； （2）         取出用手腕轻轻摇匀，加生理盐水200ｕl； （3）         混匀后，再加0.25％戊二醛75μl并轻轻混匀； （4）         分别取1/3量水平涂片、吹干、加甲醇固定； （5）         用瑞氏法染色，油镜下计数。涂片染色后RBC为红色，酵母菌为蓝色；   【结果分析】     红细胞上粘附2个或2个以上酵母菌者为花环。分别计数200个红细胞，算出花环阳性细胞百分率。第一管为RBC-C3b受体花环率，第二管为RBC-IC花环率。   【意义】 RBC-C3bR和 RBC-IC花环率可作为红细胞免疫粘附功能的指标，如二项指标都低下，判为原发性红细胞免疫功能低下，为红细胞膜C3b受体受到破环和影响所致；如果RBC-C3b受体花环率降低，而RBC-IC花环率增高，为继发性红细胞免疫功能低下，是由于CIC增加，红细胞粘附IC过多引起。