抗CD3 McAb诱导的细胞毒性T细胞功能的检测

抗CD3 McAb诱导的细胞毒性T细胞功能的检测   【试剂及材料】 （1）         靶细胞：EB病毒转化的B淋巴母细胞。 （2）         含5％NCS的RPMI-1640完全培养液 （3）         100μCi/ml 51 Cr （4）         抗CD3 McAb（4μg/ml） （5）         2％Triton X-100。   【操作方法】 （1）         靶细胞的标记:将5×105 /L 1.9ml EB病毒转化的B细胞和100μCi51 Cr/ml 100μl加入24孔培养板孔中，置37℃，5％CO2 温箱孵育18～24h。收集放射性标记的靶细胞用完全培养液洗一次，室温1500r/min离心5min。用台盼蓝染色计数细胞活性后，用完全培养液调整细胞浓度至1×105 /ml； （2）         效应细胞的制备:取无菌肝素抗凝血，采用密度梯度离心法分离PBMC，用完全培养液调整细胞浓度为1×106 /ml； （3）         在96孔培养板中分别加入效应细胞100μl，同位素标记的靶细胞50μl和抗CD3 McAb 50μl。设仅含靶细胞（无效应细胞和抗CD3 McAb）的自然释放对照孔，标记靶细胞和150μl 2％ Triton X-100作为最大释放对照孔，含靶细胞和效应细胞的自然杀伤细胞活性孔。每份均为3复孔； （4）         500～800r/min离心2min，置37℃，5％CO2 温箱中温育4h； （5）         1400r/min离心5min，用加样器从各孔收集100μl培养上清或用多孔收集器吸出全部上清，用γ计数器测量每份上清的cpm值；