免疫共沉淀／免疫印迹检测组蛋白

免疫共沉淀／免疫印迹检测组蛋白

可以用组蛋白 抗体，进行免疫印迹检测沉淀下来的组蛋白，PCR方法扩增结合到免疫沉淀下来组蛋白上的DNA。

(1)新鲜准备洗脱液(1％SDS，0．1mol／LNaHC03)。

(2)加入洗脱液250／A1洗脱所得到的琼脂糖／抗体／组蛋白复合物，短暂蜗旋，室温震荡孵育15rain，将琼脂糖离心沉淀下来，上清液转入另一离心管中，再洗脱一次，将两次洗脱液混合共约500ul。

(3)加入20ul 5MNaCl到上述洗脱缓冲液中，65~C加热4h，逆转组蛋白―DNA交联。此后的样品可以在一20C保存，第二天可以进行下面的实验。如果PCR结果不理想，可以通过下面的步骤纯化DNA样品。注意在纯化过程中可能造成DNA损失，因此操作要格外小心。

(4)加10ul 0．5mol／LEDTA，20ul 1mol／LTris―HCI(pH6．5)，2ul 10mg／ml蛋白酶K到上述洗脱液当中，45C孵育1h。

(5)通过酚―氯仿提取DNA，并用乙醇沉淀，加入20ml糖原或酵母tRNA，使DNA沉淀可见，用70％乙醇洗沉淀，空气干燥。

(6)用适当的PCR溶液重悬上述沉淀，进行下面的PCR实验。