疱疹病毒载体介导的基因转移

疱疹病毒载体介导的基因转移     单纯疱疹病毒(herps simplex virus，HSV)是一类双链DNA病毒，病毒基因组包括长单一成分(UL)、短单一成分(US)及其两侧与复制、包装相关的反向重复序列。HSV生命周期分为裂解期和隐性期两种。在隐性感染期内，病毒基因组环化、甲基化、并被压缩为较有序的染色质样结构，大部分病毒基因不表达，但是仍有病毒启动子保持转录活性。在一定条件下，隐形感染的病毒可被激活。     单纯疱疹病毒载体的优点是宿主范围广，能将外源基因导人终末分化细胞及有丝分裂后静止期细胞中表达，对神经系统有天然的亲嗜性，并能在神经元中建立长期稳定的隐性感染。因此，发展HSV―1载体将有助于神经系统疾病基因治疗，如帕金森病、阿尔茨海默病等的基因治疗。除对神经细胞有亲和性之外，单纯疱疹病毒还能感染多种细胞，包括肌肉、肿瘤、肺、肝和胰岛细胞等。病毒滴度较高，可达108～109PFU/ml。在目前所知的病毒载体系统中，HSV载体的包装容量最大，可达30kb。因此，可以同时装载多个目的基因。然而，HSV―1用于神经系统基因治疗的安全性及可靠性、对隐形感染的再激活以及病毒蛋白表达对宿主细胞的毒性等问题仍待深入研究和认识。     早期的HSV载体系统的制备方法是：首先采用野生型HSV感染细胞，再用带外源基因的载体转染该细胞，然后包装出带有外源基因的重组HSV病毒颗粒。近来有人用一种温度敏感型HSV代替野生型HSV，这种温度敏感型HSV在31~C可以正常存在，但在37~C就失去了感染繁殖的能力。因此，可利用温差变化来选择纯化重组HSV病毒。但重组HSV除含有靶基因外，还含有一部分病毒基因组，很容易产生免疫原性和细胞毒性。最近几年发展起来一种称为复制子的HSV病毒载体，它不带有HSV的结构基因，故病毒的免疫原性和细胞毒性均大大降低，对于临床试验更加安全。但是辅助病毒的分离和纯化是关键。目前，已经有40个基因治疗临床试验方案采用HSV基因转移系统，并有研究人员采用肿瘤条件复制型HSV病毒治疗中枢神经系统恶性肿瘤。