辛酸-硫酸铵法从人血清中纯化IgG

一、实验目的

1、初步掌握从血清中提取纯化IgG的方法步骤。

2、了解辛酸-硫酸铵法纯化IgG 的原理。

二、实验原理

辛酸-硫酸铵法分两步进行。第一步用辛酸沉淀杂蛋白，辛酸为短链脂肪酸，在酸性条件下可沉淀血清或腹水中的白蛋白或其他非Ig蛋白质；第二步利用硫酸铵盐析将Ig沉淀下来，操作步骤如图3-10所示。经SDS-PAGE电泳检测能得到电泳纯度较高的Ig。

三、仪器、原料和试剂

1、仪器

磁力搅拌器、离心机、低温冰柜。

2、原料

抗血清（兔抗鸡血清）。

3、试剂

(1) 乙酸-乙酸钠缓冲液：60mmol/L，pH4.0。

(2) 10×磷酸盐-NaCl 缓冲液（PBS）：100mmol/L PBS，pH7.4。称NaCl 80g、Na2HPO412H2O 29g、KCl 2g、KH2PO4 2g，加蒸馏水溶解，加入100mmol/L EDTA 20ml，用去离子水定容至l000ml。

(3) 透析液 10mmol/L Na2HPO4-KH2PO4缓冲液，含15mmol/L NaCl，pH7.2。

(4) 硫酸铵。

(5) 辛酸。