白细胞的纯化

 1．低渗处理法         [试剂及配制]       （1）蒸馏水       （2）1.8%氯化钠溶液       [操作方法]       （1）向白细胞悬液中加入1ml蒸馏水，轻轻地震荡20s，使混杂的红细胞裂解；       （2）加等量1.8%氯化钠溶液，调至等渗；       （3）再加Hank’s溶液混匀，离心沉淀，反复两次;       （4）取末次沉降细胞配成所需浓度的白细胞悬液。         2.氯化铵处理法         [试剂及配制]       （1）Gey溶液母液A：称取35.0gNaCl,1.85gKCl,1.5gNa2HPO4.H2O，0.119gKH2PO4，5.0g葡萄糖，和50mg酚红，并将上列各物溶于1000ml蒸馏水中，10磅高压蒸汽灭菌15min。如果用NH4Cl35.0g代替NaCl，补优质明胶5g，即为溶血用的Gey溶液的母液A。         （2）Gey溶液母液B：称取0.42gMgCI2·6H2O，0.14gMgSO2·7H2O，O.34gCaCl2，并将上列各物溶于100ml蒸馏水中，10磅高压蒸汽灭菌15min。         （3）NaHCO3溶液：称取2.25gNaHCO3,溶于100ml蒸馏水中，10磅高压蒸汽灭菌15min。         （4）Gey应用液：取母液A20ml,蒸馏水70ml及母液B5ml，混合后加NaHCO3溶液5ml即成。         [操作方法]       （1）在白细胞悬液中加入含氯化铵的Gey应用液1ml，轻摇2min，使红细胞裂解；       （2）加入等量的不含氯化铵的Gey应用液，离心，取沉淀细胞配成白细胞悬液。         [注意事项]       用上述诸法所得细胞悬液，含有较多粒细胞、单核细胞和血小板，而淋巴细胞纯度约为60～67%。