单克隆抗体技术-脾细胞

1．材料 (1) 免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。 (2) 1640培养液 (3) 2.5％FCS－1640营养液 2．操作方法 (1) 拉颈或用CO2 处死小白鼠。 (2) 将小鼠放于70％酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在无菌条件下取脾。 (3) 把脾放入5ml含有2.5％FCS的1640液中，冰浴下轻轻洗去脾上的红血球。 (4) 用镊子轻轻挤压脾，做成脾细胞悬液，用毛细管将悬液移入小试管中。 (5) 直立小试管3min，使大块的结缔组织下沉，把细胞悬液移入离心管中。 (6) 以2.5％FCS—1640充满离心管，并以400g离心7min～10min（与此同时应开始制备骨髓细胞）。 (7) 把沉淀用约10ml的新鲜培养液再悬浮。 (8) 重复⑹、⑺步骤。 (9) 计算细胞，以台盼兰染色用相差显微镜检查，活细胞数应高于80％为合格。