PCR-SSP HLA分型技术

PCR-SSP HLA 分型技术   PCR-SSP（sequence specific primer）分型技术是根据编码各种HLA抗原的等位基因的碱基排列顺序，设计并合成与之互补的寡核苷酸作为PCR引物，样本中HLA等位基因能够用相应的引物（即SSP）进行扩增。通过控制PCR反应条件，SSO仅扩增与其互补结合的HLA等位基因，而不扩增其他的等位基因，PCR扩增产物可用琼脂糖凝胶电泳来鉴定。因此，采用SSP引物对样本DNA进行扩增之后，PCR扩增产物的有无是鉴定HLA等位基因的基础。   提取待测标本基因组DNA ↓ 采用SSP引物进行PCR扩增相应HLA基因 ↓ 扩增后进行琼脂糖凝胶电泳检查PCR产物 ↓ 根据PCR产物的出现进行待测标本的HLA型别判断   PCR-SSP分型技术的优点为操作简单、快速，可借助自动化设备进行操作；结果直接在琼脂糖电泳凝胶上观察，判断容易，杂合子也容易检出；缺点是必须采用多对SSP引物进行扩增，而且对空气中DNA气溶胶污染比较敏感。 【试剂配制和仪器要求】 1 、主要试剂 （1） 等位基因序列特异性引物（SSP）   （2） dNTP （3） Taq多聚酶 （4） β-actin基因引物，作为PCR反应的内参照，该引物的序列如下： 5’-TACATGGCTGGGGTGTTGAA-3’ 5’-AAGAGAGGCATCCTCACCCT-3’ （5） 琼脂糖凝胶电泳所需的材料和试剂 2 、仪器设备 （1） 可调加样器（1～10ul，10～100ul，100～1000ul） （2） PCR扩增仪 （3） 琼脂糖凝胶电泳槽和电泳仪 （4） 电泳凝胶观察系统或电泳凝胶图象分析系统 （5） 涡旋震荡器