血清Western Blot去除白蛋白(Albumin)和IgG
应用Western Blotting的方法检测血清中某种蛋白的含量是,最关键的问题是要将血清做怎样的电泳前处理.一般的处理方式:1. 常规分离血清,即取血后常温
应用Western Blotting的方法检测血清中某种蛋白的含量是,最关键的问题是要将血清做怎样的电泳前处理. 一般的处理方式: 1. 常规分离血清,即取血后常温放置,使其凝固,然后 3000 rpm 15 min 离心 , 取上清即可。 2. 测血清蛋白浓度。 3. 用 Laemmli buffer （蛋白裂解液）稀释至所需浓度，我一般为 5ug/ul. 4. 加入适量 loading buffer ， 100 ℃ 煮 5 分钟。注意：有时会出现水煮后，蛋白液变得非常粘稠，这时可以在 6 5 ℃ 煮 10-20 minutes 以替代沸水煮。n 对于目标蛋白在血清中含量很低，或者目标蛋白分子量与白蛋白或球蛋白分子量相近的情况下，必烦要去除血清中的白蛋白和 / 或球蛋白，以下是一些知名厂商提供的试剂盒，使用较为简便，但价格有点贵哦。 Bio-Rad 去除白蛋白 Aurum Affi–Gel 蓝胶小型试剂盒和层析柱 通过亲和层析，Affi–Gel 蓝胶能去除血清和血浆中90%的白蛋白。去除白蛋白/IgG Aurum 血清蛋白Mini试剂盒 Aurum 血清蛋白Mini试剂盒包含了Micro Bio-Spin层析柱，其中填充了Affi-Gel 蓝胶和Affi-Gel Protein A填料。这两种树脂混合物能同时选择性地结合白蛋白和IgG，处理过的样品无需额外纯化，就能立即用于2D的分析。一次纯化就能搞定两个东西，操作步骤减少了，效率也提高了。 Qiagen 的Qproteome Albumin/IgG Depletion Kit（￥2690/6tests） MERCK 的ProteoExtract™ Albumin Removal Kit ( ￥ 3219/12tests) ，基于一种特殊的亲和树脂，可高度特异性地与白蛋白结合，从而快速、高度特异性地除去体液（血浆、血清或脑脊液）中的白蛋白，另外一种 Albumin /IgG Removal Kit ( ￥ 3734/12tests) 的纯化柱 树脂包含白蛋白结合树脂和免疫球蛋白A结合树脂，基于两种目的蛋白的洗脱条件不同，可以分别洗下80％以上的白蛋白和IgG，美 国 G-Biosciences™/Genotech™ AlbuminOUTTM 血浆和脑脊液等样品中含有大量的白蛋白，在2D 电泳和其他研究中易掩盖其他低丰度蛋白。本试剂盒用于有效去除这些样品中的白蛋白。 试剂盒利用CibachronTM 蓝色染料结合白蛋白，并优化了人白蛋白的去除方法。采用的是离心的柱方法，每个柱包含了0.2ml 染料结合树脂，可以结合> 2mg 的人白蛋白。试剂盒可有效去除5-50μl 人血浆中>98%的白蛋白，且只需10min。 高容量的染料结合树脂（10-20 mg 蛋白/ml 树脂）可瞬间结合并去除样品中的白蛋白，样品来源包括人、猪、绵羊、狗、兔、 大鼠和牛。试剂盒也可用于其他物种，有25 或50 次样品处理两种包装。 特点： Ø 10min 之内去除样品中的白蛋白 Ø 用CibachronTM蓝色染料结合白蛋白 Ø 每柱容量> 2 mg 人白蛋白 Ø 去除5-50μl 人血浆中>98%的白蛋白 (责任编辑：大汉昆仑王) |
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