流式细胞仪术检测各类免疫细胞的数量

流式细胞术（FCM）是一种高速度、高灵敏度、高精度和高分辨率的自动分析细胞的高新技术。主要用于定量分析单细胞表面、细胞内抗原和对分子水平的核酸含量的测定。

试剂及材料

1. FITC（或PE）标记的抗CD的mAb及正常小鼠IgG

2. 细胞洗液：含2%BSA、0.1%NaN3 的PBS。

3. 固定液：25%戊二醛3.2ml，葡萄糖2g加无BSA的细胞洗液至100ml。

4. 流式细胞仪

操作方法

1. 于各实验管中分别加入106 PBMC，1500r/min离心3min，弃上清；

2. 分别加入荧光素标记的抗CD的mAb 20ml，混匀；

3. 4℃孵育60min， 加入细胞洗液 ， 1500r/min离心3min，反复洗涤3次；

4. 用细胞洗液恢复体积至0.5ml，加入固定液20ml，混匀；

5. 上机检测。

注意事项

由于FITC（或PE）标记的抗CD的mAb可以从试剂公司方便购得，且方法稳定可靠，故在此介绍的是直接免疫荧光法的操作步骤。当然，也可采用间接直接免疫荧光法，操作方法同前。