三种常用免疫电泳技术

免疫电泳技术是电泳分析与沉淀反映的结合产物。这种技术有两大优点，一是加快反应的速度，二是将某些蛋白组分利用其带电荷的不同而将其分开，再分别与抗体反应，以此做更细微的分析。免疫电泳技术的种类有很多，这里仅将常用的技术介绍如下： 一、放射免疫电泳技术 将放射性元素标记的抗体（或抗原）与相应的抗原（或抗体）沉淀时，沉淀线通过自显影而证实。所谓自显影，就是通过复合物中的标记同位素在蜕变过程中放出的射线，作用于感光材料的卤化银晶体而产生潜影，再经过显影把“像”显示出来。这样，能检出肉眼看不见的沉淀线，从而提高反应的敏感性，这种方法可应用于凝胶中的所有反应。 免疫电泳中所使用的材料有 1．放射性同位素标记的抗原或抗体 2．X—射线胶片或全色胶片 3．显影液与定影液 4．其它同对流免疫电泳 具体操作方法为： 1．按对流免疫电泳制备凝胶板并打孔。

 2．加样  阴极端孔内加抗原，阳极端孔内加抗体。在加被检抗体样品时，迅速加入标记抗原（2000~3 000cpm），并使之混合，勿使抗原吸收后再标记抗原，以免由于标记原的滞面而形成假阳性。3．电泳  电流2.6cm×7.5cm的小板用4mA。4．电泳后，平板浸在3％HCl中漂洗8h，换液2次。5．用流水漂洗过夜。6．干燥  室温或鼓风机吹干。7．曝光  在暗室将胶片切成与平板一样大小，然后将药面密接凝胶面，再在胶片上压一张玻板，用黑布包严，皮筋扎紧，曝光时间与所用同位素及保存期有关。181I，一周内5h~10h；1~2周内24h；2~3周内48h。125I，在2个月内10h。8．冲洗  全色胶片冲片方法，水洗、20℃显影10min、水洗、定影、水洗、凉干，观察结果。结果判定   在抗原抗体孔之间形成一条清晰的黑色影像者，判为阳性。