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甲酰胺法(DNA 片段探针的应用实验)
材料与仪器DNA杂交液 洗膜液注射器 超声仪 水浴锅步骤1. 用5~20 ml 杂交液Ⅰ依次浸泡10~20张硝酸纤维素滤膜。滤膜装入杂交袋中,加入足够的杂交液
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制备YAC DNA进行Southern印迹分析
材料与仪器酵母菌AHC SCE SCEM Tris·Cl EDTA TE 乙酸甲 RNase A 异丙醇 NaCl培养箱 离心管 转子步骤1. 接种一个红色的
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YAC 克隆的分析实验基本方案
材料与仪器酵母菌AHC YPD 甘油培养箱 冷冻管步骤1. 用接种棒将含重组载体pYAC的AB1380菌株划线接种在AHC平板上,倒扣平板于30℃培养,直至长
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真核细胞利用 DEAE- 葡聚糖的转染实验
材料与仪器DNATBS DMEM 葡聚糖 DMSO PBS培养箱 离心管步骤1. 接种约5105小鼠L型成纤维细胞/10 cm培养皿,培养3天至30%~50%
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嵌套缺失和互补寡核苷酸进行接头分区诱变
材料与仪器DNA雾水乙醇 EDTA T4 DNA连接酶 TE NaCl培养箱 水浴锅步骤1. 用Bal 31或外切核酸酶Ⅲ及S1核酸酶在质粒的目的区域产生一嵌
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利用生物素标记引物
材料与仪器DNA生物素 Tris·Cl MgCl2 DNA聚合酶 dATP dCTP dGTP dTTP热循环仪 尼龙膜 滤纸 离心机步骤1. 在微量离心管中
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α-标记核苷酸进行热循环测序反应
材料与仪器DNADNA测序缓冲液 dATP DNA聚合酶热心换反应装置 离心机步骤1. 对应于毎个待测模板,分别以A、G、C、T 标记好4个微量离心管。2.
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测序酶进行标记测序反应
材料与仪器DNA寡核苷酸引物 测序酶终止混合液 测序酶缓冲液 焦磷酸酶混合液离心机 离心管 微量滴定板步骤1. 对于每个单链模板:将下列试剂混合于0.5 ml
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双脱氧测序的双链质粒DNA的碱变性
材料与仪器DNANaOH EDTA 乙酸钠 乙醇离心管 离心机 摇床步骤1. 加入约0.5 pmol 重组质粒DNA于0.5 ml 微量离心管中,如果体积大于
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小量裂解物中制备λ噬菌体DNA
材料与仪器重组λ噬菌体DNA酶Ⅰ RNA酶Ⅰ PEG SM SDS EDTA 异丙醇 乙酸钠 TE巴斯德吸管 试管 离心机步骤1. 在新鲜配制的λ顶层琼脂糖和
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制备单链M13噬菌体DNA
材料与仪器大肠杆菌LB TE M13聚乙二醇容易让 顶层琼脂 乙酸钠 乙醇巴斯德吸管 试管 离心机步骤1. 如果起始用M13复制型DNA或M13单链DNA,以
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DNA片段连接
原理核酸片段可以通过连接酶的作用连接起来而获得重组分子。材料与仪器λDNA EcoT14I:由11条DNA片段组成T4 DNA连接酶及其配套的10连接缓冲液 0
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质粒DNA酶切
原理限制性内切酶能够特异性地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异性位点上,并切割双链DNA。材料与仪器标准pUC19(2686bp)E
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牙签法小量制备质粒DNA实验
原理用牙签从琼脂培养基上挑取的菌落可直接用于制备质粒 DNA。所得的闭合环状 DNA 往往杂质太多,不能作为大多数限制酶的底物。材料与仪器抗生素 溴酚蓝溶液 E
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聚乙二醇沉淀法纯化质粒DNA实验
原理这种方法最早由 Richaed Treisman ( 英国,伦敦,ICRF) 参照 Lis 的工作而设计。Lis 是最早用聚乙二醇(PEG ) 分离不同大小
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