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哺乳动物 DNA 的快速分离
原理根据本方案制备的哺乳动物 DNA 约 20~50 kb，适于作 PCR 反应的模板。DNA 产量在 0.5 到 3.0 μg/mg 组织之间变化，或者是 5
2024-06-01 65 -
Southern印迹(DNA从一块琼脂糖凝胶上同时向两张膜转移)
原理DNA 可以同时从琼脂糖两面向两张膜上转移。当需要用两种不同的探针分析相同的限制性内切核酸酶酶切片段时，这种方法是很有用的。DNA 片段转移速率较快，但是由
2024-06-01 56 -
用酸性酚-硫氰酸胍-氯仿提取法纯化组织和细胞中的 RNA
原理在提取过程的第一阶段细胞的 RNA 酶应尽快灭活。一旦内源的 RNA 酶被破坏，RNA 受损的可能就大大降低，而纯化的过程就可以按合适的速度进行。材料与仪器
2024-06-01 63 -
oligo(dT)-纤维素层析法提取poly(A) + RNA
原理与 rRNA, 5SRNA, 5.8 SRNA 和 tRNA 相比，大多数真核生物的 mRNA 在其 3' 端带有 poly(A) 尾巴。因此，mR
2024-06-01 49 -
批量层析方法筛选 poly (A)+ RNA
原理当处理许多 RNA 样品或处理小量的哺乳动物总 RNA 时（<50 μg)，可选择用 oligo (dT) —纤维素进行批量层析的方法。这种方法采用级
2024-06-01 55 -
核糖核酸酶保护(用核糖核酸酶和放射性标记的RNA探针对RNA作图)
原理核糖核酸酶保护分析用于度量特异性 mRNA 的丰度以及为它们的拓扑异构特征作图。这种方法包括测试 RNA 与互补的放射标记的 RNA 探针（核糖探针）杂交，
2024-06-01 58 -
用引物延伸法进行 RNA 的分析
原理引物延伸法主要用于 mRNA5' 末端作图。poly (A) + RNA 先与过量 5' 末端标记的且与靶 RNA 互补的单链寡核苷酸引物杂
2024-06-01 66 -
聚合酶链式反应
原理材料与仪器热稳定 DNA 聚合酶 旁观者 DNA 正向引物 反向引物 模板 DNA扩增缓冲液 氯仿 dNTP 贮存液聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶 屏蔽型枪头
2024-06-01 51 -
通过PCR扩增在扩增DNA产物末端引入限制性核酸内切酶酶切位点
原理材料与仪器噬菌体 T4 DNA 连接酶 限制性内切核酸酶 靶 DNA氯仿 EDTA 乙醇 酚 氯仿 乙酸钠 TE琼脂糖凝胶 水浴箱步骤一、材料1. 缓冲液与
2024-06-01 61 -
应用 PCR 的遗传工程
原理本方案（由德克萨斯大学西南医学中心的 Andereson 提供）叙述在克隆化的哺乳动物 cDNA 的 5‘ 与 3‘ 端同时导入限制性内切核
2024-06-01 64 -
应用mRNA反转录扩增cDNA（RT-PCR）
原理酶促催化使RNA反 转 录 为cDNA第一链。 一 条寡聚脱氧核苷酸引物先 与 mRNA杂交，然 后 由RNA依赖的DNA聚合酶催化合成相应互补的cDNA拷
2024-06-01 52 -
cDNA 5’末端的快速扩增（5’-RACE）
原理在分子克隆中没有比分离缺乏相应的 mRNA 5‘ 末端的序列特征结构的 cDNA 克隆更易失败的了。通常存在于 cDNA 基因文库中的部分克隆，由于
2024-06-01 57 -
cDNA 3'末端的快速扩增（3’-RACE)
原理在用 oligo (dT) 引物构建的 cDNA 文库中，偶而发生部分 cDNA 克隆缺失了与靶 mRNA 3‘ 末端互补的序列。这部分序列到底是在
2024-05-30 73 -
应用混合寡核苷酸引物引导的cDNA扩增（MOPAC）
原理对于仅仅知道某种蛋白质的部分序列，而要克隆其基因的最佳方法是，利用已知氨基酸序列设计相应的寡核苷酸，用此寡核苷酸作为探针去筛选基因文库钓取全长基因或者用寡核
2024-05-30 57 -
随机引物法(利用寡核苷酸延伸法标记DNA放射性)
原理利用寡核苷酸作引物，DNA 聚合酶可沿单链模板起始 DNA 的合成（Gotilian 1969)。如果寡核苷酸的序列不均一，它们就可在模板的多位点上与模板杂
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