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筛选构建于λ噬菌体载体的表达文库实验
材料与仪器封闭缓冲液 氯仿 IPTG 抗原-抗体复合物检测试剂 SM TNT 缓冲液 洗涤缓冲液 放射性碘标记第二抗体 第一抗体 LB 琼脂板 LB 顶层琼脂板
2024-05-21 45 -
λ噬菌体的铺平板培养实验
原理噬菌斑起源于单个噬菌体颗粒对单个细菌的感染。第一次感染后合成的子代病毒颗粒吸附和感染邻近细菌，后者依次释放另一代子代病毒颗粒。如果细菌生长在半固体培养基（如
2024-05-21 27 -
λ噬菌体噬菌斑的挑取实验
原理遗传上同源的 λ 噬菌体原种是通过 "挑取” 一个完全独立的噬菌斑并将含有裂解物的琼脂/琼脂糖保存于贮存液中而获得的。获得的原种可用于制备噬菌体的
2024-05-21 45 -
在滤膜上进行细菌DNA的杂交实验
原理本方案介绍如何用放射性标记探针与固定在滤膜上的转化菌 DNA 进行杂交，以及从琼脂板中将与探针特异性杂交的克隆回收培养的方法，这些方法适用于平均长度大于 1
2024-05-21 41 -
通过平板裂解和洗脱制备λ噬菌体原种实验
原理来源于单个噬菌斑的 λ 噬菌体原种的制备，通常有两种方法：① 平板裂解，这是一种噬菌体在生长于顶层琼脂或琼脂糖的细菌中增殖的方法；② 小量液体培养，这是用生
2024-05-21 61 -
用小量液体培养物制备λ噬菌体原种实验
原理可通过小量液体培养物制备高滴度 λ 噬菌体原种。这一方法最早由 Leder 等（1977）采用。一般来说，它所得到的 λ 噬菌体的产量比平板裂解低且不稳定，
2024-05-21 32 -
λ噬菌体的大规模培养(低倍数感染)实验
原理λ 噬菌体的大量制备可通过低倍数感染细菌培养物或高倍数感染这两种方法获得。低倍数感染后，培养物立即被转接至大体积培养物中。因为在最初细菌培养物中只有小量的细
2024-05-21 40 -
菌落的裂解和DNA与滤膜的结合实验
原理本方案介绍如何从携带重组质粒的克隆中释放出 DNA 并将其固定于硝酸纤维滤膜或尼龙膜的方法，这一方法最初由 Grunstein 和 Hogness 使用。材
2024-05-21 34 -
通过凝胶电泳测定λ噬菌体原种和裂解物中DNA的含量实验
原理本方案阐述了一种快速估计 λ 噬菌体原种中 DNA 含量的方法。该方法首先可用于发现原种和裂解物中的噬菌体颗粒的得率是否能满足大量纯化的需要，其次可用于检测
2024-05-21 37 -
通过CsCl 等密度梯度离心纯化λ噬菌体颗粒实验
原理CsCl 等密度梯度离心用于制备最高纯度的感染性 λ 噬菌体颗粒，它没有任何细菌核酸的污染。从这种噬菌体颗粒中提取的 DNA 可用作 DNA 测序的模板、亚
2024-05-21 65 -
λ噬菌体载体DNA的碱性磷酸酶处理实验
原理λ 噬菌体两臂内部末端 5'-磷酸基团的去除，能有效防止自连和减少非重组噬菌体的背景。当使用含单一克隆位点的插入型载体（如 λgt10、λgt11
2024-05-21 36 -
经双限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体DNA的制备实验
原理置换型载体（如 λ2001、λDASH、EMBL 系列、Charon 34、Charon 35 和 Charon 40 ) 含有一系列的限制位点，它们在中央
2024-05-21 37 -
可被单一限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体DNA的制备实验
原理在某些情况下，制备好的 λ 噬菌体 DNA 经限制酶的简单消化即可用于克隆。但只有当所用载体能用遗传学方法筛选含有外源 DNA 序列的重组噬菌体时（如 EM
2024-05-21 35 -
用甲酰胺从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA实验
原理可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效，但在某种意义上它比以前的操作方法更快。材料与仪器限制性内切核酸酶 λ
2024-05-21 33 -
利用λ噬菌体文库筛选 DNA 结合蛋白实验
材料与仪器ATP 结合缓冲液 变性溶液 二硫苏糖醇 EDTA 乙醇激酶 连接酶缓冲液 酚 氯 仿筛选缓冲液 SDS 醋酸钠 TE T4 噬菌体 DNA 连接酶
2024-05-21 37
