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树脂回收法(DNA 片段的回收实验)
原理本方法特别适合于PCR片段的回收,具有纯度高、操作简洁等特点,经此方法回收的片段可有效的用于重组载体构建。通过15分钟的纯化过程,PCR产物即能被有效地从含
2024-05-21 64 -
DNA片断的酶切实验
原理酶切指采用粘末端连接必须对目的DNA分子和载体分子进行酶切以获得相应的粘末端进行连接。材料与仪器DNA片段TE缓冲液离心机 恒温水浴 取液器 电泳仪 电泳槽
2024-05-21 72 -
DNA结合蛋白测定实验
原理本分析方法是一种简单、快速和极为灵敏的用于检测粗制提取物中序列特异性的DNA结合蛋白的方法。在电泳时,与末端标记的DNA片段特异结合的蛋白质阻滞了片段的迁移
2024-05-21 65 -
鲑精担体 DNA 制备实验基本方案
材料与仪器鲑精DNATE 酚 氯仿 乙酸钠离心机 摇床 超声仪步骤1. 将TE缓冲液加入装有干燥鲑精DNA的烧杯中,至鲑精DNA浓度为5~10 mg/ml。用
2024-05-21 62 -
细胞质 S-100 组分的制备实验基本方案
材料与仪器细胞质KCl 高盐缓冲液透析膜 离心机步骤1. 测量细胞质提取物的体积,加入0.11倍体积的10细胞质提取缓冲液,充分混合。 100 000 g 离
2024-05-21 69 -
用X-gal和IPTG筛选细菌菌落(α互补)
原理显色底物 X-gal 可与细菌培养物混合,与溶化的顶层琼脂混合后铺于选择性培养板。材料与仪器重组质粒转化的 E.coliIPTG 溶液 X-gal 溶液LB
2024-05-21 66 -
筛选构建于λ噬菌体载体的表达文库实验
材料与仪器封闭缓冲液 氯仿 IPTG 抗原-抗体复合物检测试剂 SM TNT 缓冲液 洗涤缓冲液 放射性碘标记第二抗体 第一抗体 LB 琼脂板 LB 顶层琼脂板
2024-05-21 69 -
λ噬菌体的铺平板培养实验
原理噬菌斑起源于单个噬菌体颗粒对单个细菌的感染。第一次感染后合成的子代病毒颗粒吸附和感染邻近细菌,后者依次释放另一代子代病毒颗粒。如果细菌生长在半固体培养基(如
2024-05-21 63 -
λ噬菌体噬菌斑的挑取实验
原理遗传上同源的 λ 噬菌体原种是通过 "挑取” 一个完全独立的噬菌斑并将含有裂解物的琼脂/琼脂糖保存于贮存液中而获得的。获得的原种可用于制备噬菌体的
2024-05-21 79 -
在滤膜上进行细菌DNA的杂交实验
原理本方案介绍如何用放射性标记探针与固定在滤膜上的转化菌 DNA 进行杂交,以及从琼脂板中将与探针特异性杂交的克隆回收培养的方法,这些方法适用于平均长度大于 1
2024-05-21 73 -
通过平板裂解和洗脱制备λ噬菌体原种实验
原理来源于单个噬菌斑的 λ 噬菌体原种的制备,通常有两种方法:① 平板裂解,这是一种噬菌体在生长于顶层琼脂或琼脂糖的细菌中增殖的方法;② 小量液体培养,这是用生
2024-05-21 89 -
用小量液体培养物制备λ噬菌体原种实验
原理可通过小量液体培养物制备高滴度 λ 噬菌体原种。这一方法最早由 Leder 等(1977)采用。一般来说,它所得到的 λ 噬菌体的产量比平板裂解低且不稳定,
2024-05-21 53 -
λ噬菌体的大规模培养(低倍数感染)实验
原理λ 噬菌体的大量制备可通过低倍数感染细菌培养物或高倍数感染这两种方法获得。低倍数感染后,培养物立即被转接至大体积培养物中。因为在最初细菌培养物中只有小量的细
2024-05-21 68 -
菌落的裂解和DNA与滤膜的结合实验
原理本方案介绍如何从携带重组质粒的克隆中释放出 DNA 并将其固定于硝酸纤维滤膜或尼龙膜的方法,这一方法最初由 Grunstein 和 Hogness 使用。材
2024-05-21 87 -
通过凝胶电泳测定λ噬菌体原种和裂解物中DNA的含量实验
原理本方案阐述了一种快速估计 λ 噬菌体原种中 DNA 含量的方法。该方法首先可用于发现原种和裂解物中的噬菌体颗粒的得率是否能满足大量纯化的需要,其次可用于检测
2024-05-21 64