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用甲酰胺从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA
原理本方案是 Kupiec 等所述方法（1987) 的改良版本，包括用蛋白酶 K 消化细胞和组织，用高浓度甲酰胺分离 DNA-蛋白质复合物（染色质用火棉胶袋充分
2024-05-20 71 -
用蛋白酶K和苯酚从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA
原理这一程序改自最先由 Daryl Stafford 及其同事描述的方法（Blin and Stanfford 1976)。 当需要大量哺乳动物 DNA，如用于
2024-05-20 120 -
脉冲场凝胶中浓缩DNA片段的回收
原理低熔点琼脂糖切片中的 DNA 首先通过电泳浓缩进入高百分比琼脂糖凝胶中，然后用琼脂糖酶处理而分离。最终 DNA 制备通过微透析纯化。这种方法在把分离的 DN
2024-05-20 56 -
用一步法从细胞和组织中同时制备DNA、RNA和蛋白质
原理同 Chomczynski 和 Sacchi 两人于 1987 年报道的 RNA 快速提取法一样，这种方法包括用含异硫氰酸胍和酚的一种单相液来裂解细胞。加入
2024-05-20 66 -
聚丙烯酰胺凝胶中DNA的染色检测
原理与琼脂糖凝胶不同，聚丙烯酰胺凝胶灌制时不能加入溴化乙锭，因为此染料会影响丙烯酰胺的聚合。然而，电泳后可用溴化乙锭进行聚丙烯酰胺凝胶的染色。由于聚 丙烯酰胺会
2024-05-20 119 -
变性RNA在膜上的转移和固定
原理多数情况下，为检测特定的靶 mRNA，需先将 RNA 通过琼脂糖电泳分离后，再从胶上转移到二维支持物上，（通常用尼龙膜)，再与持异的标记探针杂交。正如在 N
2024-05-20 64 -
Northern杂交
原理转移并固定到膜上的 RNA 样品可以与特异的探针杂交，从而用来对所感兴趣的 RNA 进行定位。视实验人员和条件的差异，可以从多种方法中选择任意一种来标记和检
2024-05-20 161 -
纯化的RNA的点杂交和狭线杂交
原理点杂交和狭线杂交技术（Kafatos et al. 1979) 用于在同一固相支持物（通常为带电荷的尼龙膜）上固定几种核酸样品，然后用合适的探针与已固定的样
2024-05-20 75 -
用S1核酸酶对RNA作图
原理三种不同的核酸酶——S1 核酸酶、RNA 酶、外切核酸酶Ⅶ被用来进行 RNA 定量，确定内含子位置，以及用来鉴定在克隆的 DNA 模板上的 mRNA 的 5
2024-05-20 131 -
根据大小分离RNA:乙二醛化RNA的琼脂糖凝胶电泳
原理这个方法将乙二醛变性和琼脂糖凝胶电泳结合了起来（从 McMaster 和 Carmichael (1977), Thomas(1983) 的方法修改而来）。
2024-05-20 63 -
放射性标记的探针与固定在膜上的核酸的Southern杂交
原理Southern 杂交获得的信号强度取决于若干因素，包括固定的 DNA 与探针互补的比例、探针的大小及特异活性以及转移到膜上的基因组 DNA 的数量。在最佳
2024-05-20 69 -
琼脂糖凝胶栓中DNA的限制性内切核酸酶消化
原理从哺乳动物细胞、酵母或细菌分离的染色体 DNA 在琼脂糖栓中可用所需的内切酶消化。低熔点琼脂糖栓的孔足以使内切酶进入，与作为底物的基因组 DNA 相作用。消
2024-05-20 58 -
通过超滤去除DNA扩增产物中的寡核苷酸及过剩dNTP
原理PCR 反应结束后，从扩增 DNA 产物中去除扩增反应残余下来的寡核苷酸引物，引物二聚体及 dNTP 是非常必要的。首先，DNA 扩增目的产物内残余的 dN
2024-05-20 74 -
PCR产物的平末端克隆
原理靶基因经 PCR 扩增，样品进行必要的纯化回收后，接下来用平末端进行连接克隆也是分子生物学实验中常规采用的技术路线，实验一般利用噬菌体 T4 DNA 聚合酶
2024-05-20 105 -
克隆化的PCR产物连入T载体
原理由 Taq DNA 聚合酶 PCR 扩增产生的带 3' 突出端为 A 碱基的 DNA 片段能高效地克隆至 T 载体上，这种 T 载体有与 A 碱基互
2024-05-20 133
