亲和免疫组织化学技术的染色步骤

1．标记卵白素—生物素（LAB）技术 （1）石蜡切片常规脱腊入水。 （2）0.3%H 2 O 2 —甲醇10分钟，水洗。 （3）PBS洗3次。 （4）加生物素(Biotin)标记的特异性一抗，37。C30分钟，置湿盒内。 （5）PBS洗3次。 （6）加酶标记的卵白素（Avidin）, 37。C30分钟。 （7）PBS洗3次。 （8）DAB显色。 （9）流水冲洗，复染、脱水、封片。 2．桥式卵白素-生物素（BRAB）技术 （1）同LAB技术（1）--（5） （2）加卵白素（Acidin）37。C30分钟。 （3）PBS洗3次。 （4）加酶标记的生物素(Biotin), 37。C30分钟。 （5）同LAB技术（7）--（9） 3．卵白素—生物素---过氧化物酶复合物（ABC）技术（三步法） （1）同LAB技术（1）--（2） （2）必要时胰酶消化，37。C30分钟。 （3）蒸馏水洗，PBS洗2次。 （4）正常羊血清（1：5-10）室温，10-20分钟。 （5）特异性抗体适当稀释，置湿盒中37。C60分钟或4。C过夜。 （6）PBS洗3次。 （7）生物素化（Biotin）第二抗体，37。C20分钟。 （8）PBS洗3次。 （9）ABC试剂，37。C30分钟，置湿盒中。 临用前将试剂A与试剂B等量混合，稀释为1：100的浓度，滴加于切片上。 （10）PBS洗3次。 （11）同LAB技术（7）--（9） 4．ABC快速法 在大量标本染色或快速切片的免疫组化染色时，可采用ABC快速染色法。 （1）同LAB技术（1）--（3） （2）PBS洗3次。 （3）用含4%BSA和1%正常血清的PBS作用2分钟。 （4）特异性抗体—生物素化IgG—ABC混合液孵育15分钟。 （5）PBS洗3次。 （6）同LAB技术（8）--（9） 特异性抗体—生物素化IgG—ABC混合液的配制：于染色前30分钟用等体积的生物素化IgG—ABC混合，然后加入经适当稀释的特异性抗体。