微量补体结合反应(以钩端螺旋体病为例)
本试验采取热法血清稀释法。每滴相当于0.02ml,总量为6滴,相当于0.12ml。一、材料1、抗原 系各型菌株培养物多价抗原,按瓶签说明倍数稀释;2、溶血素 正
本试验采取热法血清稀释法。每滴相当于0.02ml,总量为6滴,相当于0.12ml。
一、材料
1、抗原 系各型菌株培养物多价抗原,按瓶签说明倍数稀释;
2、溶血素 正式试验时使用2个工作单位;
3、补体系冻干补体 用灭菌生理盐水作1:5基础稀释。在溶血素效价测定和补体效价滴定时均作1:60稀释,在正式试验时,用2个工作单位;
4、1%的红血球悬液 用灭菌生理盐水洗涤与配制。在使用时与等量含2个工作单位的溶血素液配成致敏红血球悬液;
5、阳性血清 正式试验时1:100稀释;
6、阴性血清 正式试验时1:10稀释;
7、生理盐水。
二、预实验
1、溶血素效价测定 用小试管做时,单位为ml;用血清稀释板做时,单位为滴。
(1)溶血素稀释
先将溶血素做1:1000基础稀释。见表1。
表1 溶血素稀释表(单位:滴)
稀释度 | 1:1000 | 1:2000 | 1:3000 | 1:4000 | 1:5000 | 1:6000 | 1:7000 | 1:8000 |
生理盐水 | —— | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
1:1000溶血素 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
(2)溶血素效价测定
见表2。
表2 溶血素效价测定表(单位:滴)
1:1000 | 1:2000 | 1:3000 | 1:4000 | 1:5000 | 1:6000 | 1:7000 | 1:8000 | |
溶血素 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
1:60补体 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 |
生理盐水 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 |
1%红血球悬液 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
置微型振荡器震荡3-5min后,放37℃水浴10min | ||||||||
溶血程度举例 | # | # | # | # | # | +++ | + | - |
根据上述结果,溶血素效价为1:5000即为一个工作单位,2个工作单位溶血素为1:2500稀释度。