免疫酶组化法(猪瘟组化法)

材料与 试剂 1．α－萘酚液 α一苯酚 1.00g 40%乙醇 100.00ml 3%H 2 O 2 0.20ml 混合即可,现用现配。 2．派洛宁液 派洛宁(Pyroming) 0.10g 苯胺(Aniline) 4.00g 40%乙醇 96.00ml 3．内源性酶抑制剂：0.01%H 2 O 2 的0.01%的叠氮钠溶液。 1%H 2 O 2 1.00ml 1%Na N 3 1.00ml 0.015mol/L pH 7.4 PBS液 100.00ml 4．0.05Mol/L pH 7.6 Tris－HCl缓冲液 A液：0.2mol/L Tris液 三羟甲基氨基甲烷 2.43g H 2 O 100.00ml B液：0.1mol/L HCl 取A液25ml，B液38.9ml，混合，加 蒸馏 水至100ml即可。 5．DAB液(Karnovsky液) 0.05Mol/L pH 7.6 Tris－HCl缓冲液 100.00ml 3，3－二胺基联苯胺盐酸盐 76mg 1% H 2 O 2 0.5ml 配后立即使用。 6．0.10Mol/L pH7.4 PBS液。 操作方法 1．猪瘟酶标抗体工作滴度的确定 对组化法来说，最简单的确定工作滴度的方法是将酶标抗体进行一系列的倍比稀释，然后对已知阳性标本片进行染色，以最为清晰的阳性结果的最大稀释倍数或稍提高1～2滴度作为工作滴度。 购买商品猪瘟酶标抗体,则按其说明的工作浓度稀释即可。 2．待检标本片的制作 取可疑猪瘟病猪尸体或急宰病猪立即剖检，采取肾脏、脾脏、淋巴结等脏器进行触片(或涂片)或冷冻切片(4µm厚度)。余下组织 低温冰箱 保存或放于盛有50%甘油盐水中于普通冰箱保存，以备复检或比较用。也可采病猪之血作血球粥片。标本片干后，立即以4℃的丙酮液固定15min。固定后的标本片可贮藏于4℃冰箱中备用。