人B7-H4(B7-H4)ELISA试剂盒 说明书
人B7-H4 ( B7-H4 )ELISA 试剂盒
( 用于血清、血浆、细胞培养上清液和尿液生物体液内 )
原理
本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗人 B7-H4 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 B7-H4与单抗结合，加入生物素化的抗人 B7-H4 ，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的 Streptavidin 与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在 450nm 处测 OD 值，B7-H4 浓度与 OD 值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中B7-H4 浓度。
试剂盒组成 （ 2-8 ℃保存）
酶标 板 （Coated Wells ） | 96 孔 | 酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate ） | 12ml |
10 ×标本稀释液（Sample Buffer ） | 12ml | 20×浓缩洗涤液（ Wash Buffer ） | 50ml |
标准品 （Standards ） ： 20ng/瓶 | 2 瓶 | 底物工作液（TMB Solution ） | 12ml |
第一抗体工作液（ Biotinylated Antibody ） | 12ml | 终止液 （Stop Solution ） | 12ml |
准备试剂与收集血样
1. 收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆、尿液等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时；更长时间须冷冻（ -20 ℃或 -70 ℃ ）保存，避免反复冻融。
2. 标准品液配制：使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀，配成 4 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管，第一管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在第一管中加入 4 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二 管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。
3. 10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释（ 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。
4. 洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）
检测程序
1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。
2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。
3. 每孔中加入第一抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。
6. 洗板：同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ，置 37 ℃ 暗处反应15 分钟。
8. 每孔加入100ul 终止液混匀。
9. 30分钟内用酶标仪在 45 0 nm 处测 吸光值。
结果计算与判断
1. 所有 OD 值都应减除空白值后再行计算。
2. 以标准品4000 、 20 00 、100 0 、500 、 250 、 125 、 62.5 、 0 pg /ml 为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。
3. 根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应 B7-H4 含量 即可 。
试剂盒性能
1. 灵敏度 ： 最小的B7-H4 检测浓度小于 30 pg/ml。
2. 特异性： 可同时检测重组或天然的人 B7-H4 。 不与 人其它细胞因子有交叉反应。
3. 重复性：板内、板见变异系数均小于10％。
注意事项
1. 以上标准孔及待 测 样品均建议做复孔，每次测定应同时 做 标准曲线。
2. 洗涤过程 很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及 OD 值错误地升高。
3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持 板条干燥 。
4. 本试剂盒宜置 4 o C冰箱保存。
5. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！
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